Бульон мартена это
Мартена бульон, пептон (A. J. Martin) — питательная среда, применяемая для культивирования различных бактерий, а также для получения дифтерийного токсина.
Мартена пептон — ферментативный кислотный гидролизат желудков свиней или других животных (рогатого скота, собак).
Крупные свиные желудки с большим количеством слизи и неповрежденной слизистой оболочкой вытирают снаружи (мытья следует избегать, так как при этом вымываются ферменты) и освобождают от содержимого. Измельченные желудки заливают подкисленной (20 мл соляной кислоты на 1 л) водой, подогретой до 50°, перемешивают и помещают в термостат на 18 час. при t° 45°. Смесь тщательно перемешивают каждые 2 часа. Через 18 час. пептон прогревают 5 мин. при t° 80°, охлаждают до 45°, добавляют на 1 л пептона 2 мл ледяной уксусной кислоты и оставляют на холоду для отстаивания. Содержание пептонов должно быть 3—4%, аминного азота — 130—160 мг. Пептон хранят при температуре не выше 8—10°.
Мартена бульон готовят следующим образом: сливают сифоном прозрачную часть пептона, нагревают до 80°, нейтрализуют 20% раствором едкого натра, кипятят 5 мин. и фильтруют. Затем смешивают равные количества пептона и мясной воды, кипятят 5—10 мин., добавляют 0,25% раствор хлористого натрия, снова кипятят, устанавливают нужную реакцию среды и фильтруют. Готовый бульон дробно в течение двух дней стерилизуют текучим паром. В готовом виде бульон Мартена содержит 1,5—2% пептона и 110—130 мг аминного азота.
См. также Бульон мясо-пептонный, Питательные среды.
МАРТЕНА БУЛЬОН (L. Martin, франц. бактериолог, 1864—1946) — питательная среда, предложенная в 1898 г. франц. бактериологом Мартеном для культивирования бактерий и получения дифтерийного токсина.
М. б. получил широкое распространение. Он применяется в различных модификациях и для различных целей.
М. б. готовится из Мартена пептона — ферментативного кислотного гидролизата свиных желудков.
В основу приготовления пептона положен ферментативный гидролиз белков в кислой среде с помощью пепсина, находящегося в слизистой оболочке желудка свиньи (используются желудки и других животных). Свежие свиные желудки с упругими стенками и обильным слизистым слоем складывают слизистой оболочкой внутрь, тщательно очищают от жира и желчи, обтирают снаружи марлей (не мыть!), разрезают на небольшие куски и измельчают на мясорубке.
Воду, нагретую до t° 48—50°, подкисляют свободной от железа соляной к-той (уд. вес 1,19; 10 мл на 1 л воды) и разливают в трехлитровые бутыли — по 2 i в каждую. Затем в бутыли кладут по 600 г измельченной массы, закрывают ватными пробками, тщательно перемешивают содержимое и немедленно, чтобы не успела остыть вода, помещают в термостат при t° 45° на 18 час. Температуру в термостате необходимо поддерживать строго постоянной и содержимое бутылей тщательно перемешивать каждые 2 часа. Через 18 час., когда содержание аминного азота достигнет 110—180 мг, пептон прогревают в автоклаве при t° 80° в течение 5 мин., чтобы инактивировать ферменты и т. о. прервать процесс гидролиза.
По охлаждении до t° 45° добавляют ледяную уксусную к-ту (из расчета 2 мл на 1 л пептона) и закрывают бутыли свежими стерильными ватными пробками и бумажными колпачками. Употребляют пептон не ранее чем через 5 дней после изготовления, когда осадок отстоится и жидкость сделается прозрачной. Хранить пептон нужно при t° не выше 8— 10°. В растворе должно быть от 3 до 4% пептона и 130—160 мг аминного азота. Качество пептона отражается на изготовляемом из него бульоне, поэтому следует внимательно отбирать желудки и строго выдерживать режим гидролиза, тщательно перемешивая содержимое бутылей, Пептон Мартена используют также для изготовления твердых питательных сред.
Приготовление Мартена бульона. Сифоном или пипеткой Мора отсасывают прозрачный слой отстоявшегося мартенового гидролизата, нагревают его до t° 80°, подщелачивают 20% р-ром NaOH до pH 7,0, кипятят в течение 5 мин. и фильтруют через марлю с ватой. К фильтрату надо добавить равное количество мясного настоя, предварительно тоже отфильтрованного. Смесь нагревают до кипения Pi кипятят 5 мин. Затем добавляют 0,25% р-р хлорида натрия, устанавливают желаемую реакцию (pH 7,0—8,0), снова кипятят, проверяют pH и, если потребуется, исправляют пропорцию. В зависимости от назначения бульона в него добавляют другие ингредиенты, после чего снова кипятят его.
Изготовленный бульон тщательно фильтруют до полной прозрачности через полотняные фильтры и разливают в стерильную посуду, к-рую предварительно стерилизовали текучим паром двукратно по 40 мин., с промежутком не менее 18 и не более 24 час.
В готовом М. б. пептон содержится в количестве 1,5—2%, аминный азот — 110—130 мг. Буфер-индекс — 10—12 мг.
Библиография: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, с. 104, М., 1973; Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера, с. 52, М., 1973; Martin L. Production de la toxine dipht^rique, Ann. Inst. Pasteur, t. 12, p. 26, 1898.
Необходимость культивирования микробов связана не только с целью выделения возбудителя болезни из исследуемого материала и определения его вида, но и для накопления микробной массы при изготовлении биологических препаратов: вакцин, антигенов и аллергенов. Для культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях применяют различные искусственные питательные среды.
Питательные среды бывают: по консистенции — жидкие, плотные, полужидкие; по происхождению — животного, растительного происхождения и синтетические среды постоянного состава; по назначению — обычные, или простые, для выращивания большинства микроорганизмов; специальные — для культивирования микробов, не растущих или плохо растущих на обычных питательных средах; дифференциально-диагностические — употребляемые для определения родовых или видовых особенностей исследуемых бактериальных культур (гемолитических, сахаролитических, протеолитических, редуцирующих и других свойств); селективные — для выделения микробов одного рода или вида из материала, содержащего смесь разных видов микроорганизмов, на которых одни виды хорошо растут, а другие не растут; среды обогащения (накопительные).
Основой многих питательных сред животного происхождения является мясная вода. Ее готовят из свежего нежирного говяжьего мяса, освобожденного от костей, фасций, сухожилий. Измельченное мясо (мелкие кусочки или фарш) заливают дистиллированной водой в соотношении 1 : 2 (на 1 кг мяса 2 л воды). Экстрагируют 12—24 ч, кипятят 1,5— 2 ч, фильтруют, добавляют дистиллированной воды до первоначального объема, разливают в бутыли, колбы, закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве.
Обычные (простые) среды.
Мясо-пептонный бульон (МПБ) — жидкая питательная среда. Для его приготовления к 1 л мясной воды добавляют 1% пептона, 0,5% химически чистой поваренной соли и кипятят. Мясная вода слабокислой реакции, поэтому МПБ подщелачивают — добавляют небольшое количество 10— 15%-ного раствораКОН или NaOH, кипятят 2—3 мин, проверяют рН при помощи компаратора Михаэлнса (рис. 30) или электропотенциометром. Мясо-пептонный бульон фильтруют через бумажный фильтр, разливают по пробиркам, автоклавируют.
Мясо-пептонный агар (МПА) — плотная питательная среда. К МПБ добавляют 2% агар-агара (без-азотистое органическое вещество, полученное из морских водорослей) и кипятят до его расплавления, в горячем виде устанавливают рН, кипятят 5—10 мин, фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки или колбочки, автоклавируют. После стерилизации горячие пробирки с агаром раскладывают наклонно под углом 5—6°. При застывании образуется скошенная плотная поверхность.
Мясо-пептонный полужидкий агар готовят так же, как и МПА; различие заключается в том, что агар-агара добавляют меньше — 0,15—0,20—0,25%.
Специальные питательные среды.
Бульон Мартена. Свиные желудки (или сычуги рогатого скота) очищают от жира, фасций, измельчают в мясорубке, заливают водой 1 : 4 и добавляют 1% (кобъему жидкости)соляной кислоты. Смесь выдерживают при 50° 24 ч, нейтрализуют 20%-ным раствором NaOH до щелочной реакции по лакмусу, автоклавируют при 120° 15 мин. Для приготовления бульона смешивают равные количества мясной воды и полученной смеси, кипятят 10 мин, подщелачивают 20%-ным раствором NaOH до рН 7,9, кипятят 30 мин, фильтруют, разливают в пробирки, автоклавируют при 0,5 атм (110°) 30 мин.
Добавление 2% агара обеспечивает получение плотной среды — агар Мартена.
Бульон Хоттингера готовят из триптического гидролизата (перевара) мясных отходов — фасций, жира, сухожилий. .1 кг мясных обрезков заливают 2 л кипящеЙ воды, кипятят 5 мин, охлаждают до 45° и добавляют 5,0—10,0 панкреатина, подщелачивают до рН 7,8—8,0 углекислым натром, встряхивают и доливают хлороформ (10 мл на 1 л), плотно закрывают, выдерживают в теплом месте 10 дней, ежедневно встряхивая. Полученный перевар подкисляют соляной кислотой до рН 5,5. Хранят в темном месте. Для приготовления питательной среды к 1 л воды добавляют 100—200 мл полученного перевара, кипятят 1—2 мин, фильтруют, подщелачивают, стерилизуют. Агар Хоттингера готовят так же, как и обычный МПА.
Сахарный (глюкозный) бульон (или агар) изготавливают как обычные среды, но к ним добавляют 1—2% глюкозы и стерилизуют текучим паром или автоклавируют при 0,5 атм.
Мясо-пептонная желатина. К МПБ добавляют 10—20% желатины (продукт, получаемый из клейдающих тканей животных), расплавляют и в горячем виде устанавливают нужную реакцию среды, пропускают через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки, стерилизуют текучим паром дробно.
Мясо-пептонный печеночный бульон Китт — Тароцци — жидкая среда для культивирования анаэробов. Печень крупного рогатого скота нарезают мелкими кусочками, заливают водой 1:1, кипятят, фильтруют и печеночную воду добавляют к МПБ 2 : 1 (на 2 л МПБ 1 л печеночного отвара), кипятят, устанавливают рН, разливают по пробиркам высоким столбиком, в которые предварительно положены кусочки вареной печени. В пробирки поверх среды наливают 1—2 мл вазелинового масла и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм 30 мин.^
Сывороточный бульон и сыворо-точный мясо-пептонный агар готовят путем асептического добавления к МПБ или расплавленному н охлажденному до 45—50° МПА 5—10% стерильной сыворотки крови лошади (или барана, кролика), затем сывороточный бульон разливают в стерильные пробирки (колбы).
Сывороточный МПА разливают или в пробирки (столбиком) . или в чашки Петри.
Дифференциально-диагностические среды. Кровяной МПА применяют для выявления гемолитических свойств бактерий. Предварительно в стерильную колбочку со стеклянными бусами асептично берут кровь (у барана, лошади или кролика), встряхивают 15—20 мин, чтобы фибрин отделить от остальной массы крови. Фибрин сгустками осаждается на бусах и дефибринированную кровь (5—10%) стерильно добавляют к расплавленному и остуженному МПА, легким вращением колбочки равномерно смешивают и разливают в стерильные чашки Петри.
Среды Гисса. В пептонную воду (состоящую из дистиллированной воды, 0,5% NaCl и 1% пептона) добавляют 0,5% углевода (сахар или многоатомный спирт) и 0,5% индикатора Андрэдэ. Обычно готовят набор сред с разными углеводами, каждый в отдельности. Используемый индикатор представляет собой 0,5 г кислого фуксина, 16 мл 4%-ного раствора NaOH, 100 мл дистиллированной воды. Среды с углеводами разливают в пробирки с «газовками» (поплавками), опущенными в пробирки вверх дном. Стерилизуют среды с углеводами текучим паром дробно. . Среды Гисса могут быть жидкие и полужидкие- (без газовок), содержащие 0,25% агара. При ферментации того или _иного углевода микробом, растущим в данной среде, образуется кислота, под действием которой восстанавливается цвет краски индикатора. Среда приобретает красный цвет. Образовавшиеся прн ферментации углевода газообразные продукты скапливаются в поплавках.
Среда Эндо. В расплавленный МПА (рН 7,4— 7,6) вносят 0,5—1% лактозы и 0,5% насыщенного спиртового раствора основного фуксина, обесцвеченного добавлением по каплям 10%-ного сернокислого натрия. Среду кипятят и разливают в чашки Петри. Бактерии, сбраживающие лактозу, на этой среде растут в виде красных колоний.
Среда Левина. Готовят 2%-ный агар на бульоне Хоттингера, рН 7,2—7,4, стерилизуют в автоклаве. К 100 мл готового расплавленного агара добавляют: 2 мл 0,5%-ного раствора метиленовой синьки, 1,5 мл 2%-ного эозина (щелочного бактериологического), 2 г лактозы и 0,2 г двуосновного фосфорнокислого калия (КаНРО4). Растворы красителей готовят на дистиллированной воде и стерилизуют в аппарате Коха. Раствор метиленовой синьки перед употреблением подогревают на водяной бане и добавляют к агару в теплом виде. После добавления этих компонентов среду тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Среда фиолетового цвета.
Висмут-сульфит агар (среда Вильсон— Блера). МПА (рН 7,5) с индикатором, содержащим лимонно-кислый висмут, сернокислый натрий, соль Мора (серноаммонийная соль железа), двуосновной фосфорнокислый натрий, глюкозу и бриллиантовую зелень. В настоящее время висмут-сульфит агар (как и агар Эндо, среду Плоскирева) промышленность выпускает в сухом порошкообразном виде. 6 г сухого порошка растворяют в 100 мл дистиллированной воды, подогревают при непрерывном помешивании, разливают в стерильные пробирки и оставляют в наклонном положении. Применяют также среды с химическими веществами, которые изменяют окраску в результате окислительно-восстановительных (редуцирующих) процессов, обусловленных ферментами бактерий. . Для этого готовят молоко с метиленовой си нько й. Свежее обезжиренное коровье молоко подщелачивают двууглекислым натром до слабощелочной реакции по лакмусовой бумажке, добавляют 1%-ный водный раствор метиленовой синьки да голубого окрашивания. Стерилизуют текучим паром дробно.
Если есть предположение, что в исследуемом материале имеется небольшое количество бактерий, то рекомендуют использовать среды накопления (обогащения). С р ед а Шустовой: к МПА (рН 7,4) добавляют 10% 50%-ного водного раствора гипосульфита и 2% раствора Люголя. Применяют для накопления бактерий паратифа. Среда Раппопорт: к МПБ добавляют 1% глюкозы, 10% желчи и 1% индикатора Андрэде. Стерилизуют текучим паром.
Синтетические среды применяют для изучения метаболизма бактерий и других биологических особенностей. Их составляют из химически чистых растворимых в воде веществ, в строго определенных количествах: фосфорнокислого аммония, фосфорнокислого калия, хлористого натра, сернокислого магния, глюкозы или другого углевода, никотинамида и др. По мере необходимости готовят плотные синтетические среды путем добавления агара. Стерилизуют в автоклаве. (Синтетические среды Моделя, Соттона
Для культивирования дрожжей и плесневых грибов используют следующие среды
Синтетическая среда Ван-Итерсона : азотнокислого аммония (NaH4NO3) 0,5, калия фосфорнокислого одноосновного (КН2РО4) 0,5, воды водопроводной 1 л. Автоклавируют при 1 атм 20 мин.
Глюкозный агар Сабуро: глюкозы 4,0, пептона 1,0, агара 1,8, воды 100 мл. Стерилизуют автоклавироваиием.
Агар Литмана с бычьей желчью: пептона 10,0, глюкозы 10,0, обезвоженной бычьей желчи 15 мл, кристаллвиолета 0,01, воды 1 л, агара 20,0. Стерилизуют в автоклаве при 1 атм 15 мин. Разливают в*чашки толстым слоем, чтобы предупредить обезвоживание среды.
Мартена бульон — (L. Martin, 1864 1946, франц. бактериолог) жидкая питательная среда для культивирования микроорганизмов, состоящая из пептона Мартена, мясного настоя и хлорида натрия … Большой медицинский словарь
Сахарный бульон — питательная среда для стрептококков и др. бактерий. Готовят добавлением к МПБ, сделанному на основе перевара Хоттингера (рН 8), или к бульону Мартена (рН 8,2) 40% стерильного р ра глюкозы так, чтобы конечная концентрация глюкозы достигала 1 2%.… … Словарь микробиологии
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ — ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, искусственные среды того или иного состава, предназначенные для культивирования микробов и простейших в лабораторных условиях. Впервые были введены для изолирования отдельных видов бактерий Р. Кохом в 1881 году, что создало… … Большая медицинская энциклопедия
ЧУМА — ЧУМА. Содержание: Этиология. 630 Эпидемиология. 638 Географическое распространение. 644 Патологическая анатомия. 650 Патогенез. 656 Клиника. 657… … Большая медицинская энциклопедия
КЛИЗМА — КЛИЗМА, клистир (отгреч. klyzo выполаскиваю), технический прием, состоящий в том, что в прямую кишку вводится какое либо жидкое вещество вода, лекарственные растворы, масло, жидкие взвеси и пр. Главное назначение К. лечебное воздействие;… … Большая медицинская энциклопедия
Связанные словари
Мартена бульон
(L. Martin, 1864—1946, франц. бактериолог)
жидкая питательная среда для культивирования микроорганизмов, состоящая из пептона Мартена, мясного настоя и хлорида натрия.
1. Малая медицинская энциклопедия. — М.: Медицинская энциклопедия. 1991—96 гг. 2. Первая медицинская помощь. — М.: Большая Российская Энциклопедия. 1994 г. 3. Энциклопедический словарь медицинских терминов. — М.: Советская энциклопедия. — 1982—1984 гг
Пептон Мартена - белковая основа питательных сред. Используется для приготовления диагностических сред и сред для хранения микроорганизмов.
Представляет собой прозрачную жидкость коричневого цвета.
Пептон Мартена используется для приготовления бульона Мартена. Для этого его смешивают в равных частях с мясной водой, устанавливают необходимый рН, кипятят в течение 15 мин, фильтруют через фильтровальную бумагу, разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при 0,5 атм. в течение 30 мин.
Препарат необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30°С.
Срок годности: 1 год.
Форма выпуска: стеклянные флаконы по 200 и 400 мл.
Помимо вышеуказанной мясной среды, использовали для приготовления токсина Cl. botulinum типа Е мясо-пептонный бульон с кусочками мяса или печени, а также мясной бульон — из пептического гидролизата мяса (Е. Д. Кушнир, 1937), питательную среду — из отвара бычьего сердца с1 кусочками рубленого мяса (С. Dolman, D. Kerr, 1947) или из настоя сердца с 1—2% пептона и 0,5% глюкозы (A. Barron, G. Reed, 1954), бульон Хоттингера (К. И. Матвеев, Т. И. Булатова, 1959).
По материалам Н. Meisel с соавт. (1964), наиболее оптимальной средой для токсинообразования Cl. botulinum типа Е является бульон из мяса и печени, переваренных папаином, на котором получали токсин силой 104 DLm/мл. Использовались для производства токсина типа Е также казеиновые среды (A. Barron, G. Reed, 1954; Е. Brewnn, 1963 и др.). Однако токсинообразование на них было слабое.
В последние годы были получены ботулинические токсины типа Е на средах, в которых мясной субстрат был частично или полностью вытеснен ферментативными или кислотными переварами казеина и рыбной муки с добавлением в качестве ростовых факторов кукурузного и дрожжевого экстрактов. Так, К. И. Матвеев, Т. И. Булатова (1959), А. А. Воробьев с соавт. (1962) для получения токсина Cl. botulinum типа Е выращивали штамм, на рыбо-казеиновой среде (К. И. Матвеев, Т. И. Булатова, 1959), на казеиново-грибной (Т. И. Булатова, К. И. Матвеев, И. Н. Виноградова, 1959).
В. И. Чернявский (1970), О. И. Зимина с соавт. (1971) разработали для производства токсина Cl. botulinum типа Е казеиново-альбуминовую среду, состоящую из кислотного гидролизата казеина, панкреатического гидролизата альбумина крови крупного рогатого скота и 3% декстрина. Полученный на этой среде токсин содержал 3—7 тыс. DLM/мл, анатоксин — 3—3,5 ЕС/мл. М. Gordon с соавт. (1957) и М. Fiock с соавт. (1961) предложили для культивирования Cl botulinum типа Е немясную питательную среду, состоящую из 2% пептон-протеазы, 2% дрожжевого экстракта и 1 % глюкозы. Полученные на этой среде токсины содержали 5000 DLM.
При сравнении токсинообразования Cl. botulinum типа Е на различных питательных средах (бульон Мартена, Глузмана и безмясные питательные среды, содержащие кислотный гидролизат китовой муки или ферментативный перевар казеина с кукурузным экстрактом) наилучшее, токсинообразование наблюдалось на бульоне Мартена (Ю. А. Шаронов. Р. А. Афанасьева, 1968). Уменьшение в бульоне Мартена пептона и замена его кислотным или панкреатическим гидролизатом казеина не снижало активности токсина (К. А. Шаронов, Р. А. Афанасьева, Г. С. Атаманова, 1970); G. А. Соловьевой (1973) было проведено сравнительное изучение токсинообразования Cl. botulinum типа Е на различных мясных питательных средах (бульон Мартена, Рамона, Глузмана, Попе). Ей было показано, что наилучшее токсииообразование наблюдается на бульоне Мартена, затем на бульоне Рамона.
Токсин типа Е впервые был получен в 1958 г. (V. Moller, I. Scheild, 1960). И. М. Михайлова (1965), И. М. Михайлова, В. К. Гольшмид (1966) на печеночном бульоне получали его с активностью 20 тыс. DLM/мл для белых мышей, В. П. Ца- рапкнн (1970) на среде из пептона Мартена, кукурузного экстракта и мальтозы — в 1,5—2 млн. DLM/мл и 3 L+,; Е. В. Перова, Т. И. Булатова, Л. С. Лукина (1970) на не мясной среде получали токсин F в 100000—200000 Dlm/мл для белых мышей. Н. А. Лихварь, И. Н. Виноградова, Е. В. Власова, Л. С. Лукина, Е. В. Перова (1969) использовали с этой целью сухой гидролизат казеина средней степени расщепления и получили токсин 50 000 Dlm/мл. Сравнительное культивирование Cl. botulinum типа F на различных питательных средах: бульоне Мартена, среде из пептона Мартена с кукурузным экстрактом, мальтозой и глюкозой, бульоне Глузмана, печеночном бульоне, среде из гидролизатов китовой муки и казеина выявило наилучшее токсинообразование на среде из пептона Мартена с кукурузным экстрактом и классическом бульоне Мартена (В. П. Царапкин, 1972).
Глава 15. Стрептококки
К роду Streptococcus относятся: Streptococcus pyogenes (гемолитический) и Streptococcus pneumoniae (пневмококк). Впервые стрептококки были обнаружены Бильротом (1874), Л. Пастером (1879). Изучены они были Э. Розенбахом (1884).
Streptococcus pyogenes (гемолитический)
Морфология. Стрептококки - это кокки, имеющие шаровидную форму. Диаметр каждого кокка в среднем 0,6-1 мкм, однако для них характерен полиморфизм: встречаются мелкие и крупные кокки, строго шаровидные и овальные. Стрептококки располагаются цепочкой, что является результатом деления их в одной плоскости. Длина цепочек разная. На плотной питательной среде цепочки обычно короткие, на жидких - длинные. Стрептококки неподвижны, не имеют спор (см. рис. 4) Свежевыделенные культуры иногда образуют капсулу. На ультратонких срезах видна микрокапсула, под ней расположена трехслойная клеточная стенка и трехслойная цитоплазматическая мембрана. Грамположительны.
Культивирование. Стрептококки - факультативные анаэробы. Растут при температуре 37° С и рН среды 7,6-7,8. Оптимальными средами для их выращивания являются среды, содержащие кровь или сыворотку крови. На плотных питательных средах колонии стрептококков мелкие, плоские, мутные, сероватого цвета. На агаре с кровью некоторые разновидности стрептококков образуют гемолиз. β-Гемолитические стрептококки образуют четкую зону гемолиза, α-гемолитические стрептококки образуют небольшую зеленоватую зону (результат перехода гемоглобина в метгемоглобин). Встречаются стрептококки, не дающие гемолиза.
На сахарном бульоне стрептококки растут с образованием пристеночного и придонного мелкозернистого осадка, бульон при этом остается прозрачным.
Ферментативные свойства. Стрептококки обладают сахаролитическими свойствами. Они расщепляют глюкозу, лактозу, сахарозу, маннит (не всегда) и мальтозу с образованием кислоты. Протеолитические свойства у них слабо выражены. Они свертывают молоко, желатин не разжижают.
Токсинообразование. Стрептококки образуют ряд экзотоксинов: 1) стрептолизины - разрушают эритроциты (О-стрептолизин обладает кардиотоксическим действием); 2) лейкоцидин - разрушает лейкоциты (образуется высоковирулентными штаммами); 3) эритрогенный (скарлатинозный) токсин - обусловливает клиническую картину скарлатины - интоксикацию, сосудистые реакции, сыпь и пр. Синтез эритрогенного токсина детерминирован профагом; 4) цитотоксины - обладают способностью вызывать гломерулонефрит.
Антигенная структура и классификация. У стрептококков обнаружены различные антигены. В цитоплазме клетки содержится видовой нуклеопротеидной природы антиген - единый для всех стрептококков. На поверхности клеточной стенки расположены протеиновые типовые антигены. В клеточной стенке стрептококков обнаружен полисахаридный групповой антиген.
По составу полисахаридной группоспецифической фракции антигена все стрептококки делятся на группы, обозначаемые большими латинскими буквами А, В, С, D и т. д. до S. Кроме групп, стрептококки разделены на серологические типы, которые обозначаются арабскими цифрами.
Группа А включает 70 типов. В эту группу входит большинство стрептококков, вызывающих различные заболевания у человека. Группа В включает в основном условно-патогенные для человека стрептококки. Группа С включает патогенные для человека и животных стрептококки. Группа D состоит из непатогенных для человека стрептококков, однако в эту группу входят энтерококки, которые являются обитателями кишечного тракта человека и животных. Попадая в другие органы, они обусловливают воспалительные процессы: холециститы, пиелиты и др. Таким образом, их можно отнести к условно-патогенным микробам.
Принадлежность выделенных культур к одной из серологических групп определяют с помощью реакции преципитации с групповыми сыворотками. Для определения серологических типов используют реакцию агглютинации с типоспецифическими сыворотками.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Стрептококки довольно устойчивы в окружающей среде. При температуре 60° С погибают через 30 мин.
В высушенном гное и мокроте они сохраняются месяцами. Обычные концентрации дезинфицирующих веществ губят их через 15-20 мин. Энтерококки значительно устойчивее, дезинфицирующие растворы убивают их только через 50-60 мин.
Восприимчивость животных. К патогенным стрептококкам чувствителен рогатый скот, лошади, собаки, птицы. Из лабораторных животных чувствительны кролики и белые мыши. Однако стрептококки, патогенные для человека, не всегда патогенны для экспериментальных животных.
Источники инфекции. Люди (больные и носители), реже животные или инфицированные продукты.
Пути передачи. Воздушно-капельный и воздушно-пылевой, иногда пищевой, возможен контактно-бытовой.
Заболевания могут возникать в результате экзогенного заражения, а также эндогенно - при активации условно-патогенных стрептококков, обитающих на слизистых оболочках зева, носоглотки, влагалища. Снижение сопротивляемости организма (охлаждение, голодание, переутомление и пр.) может привести к возникновению аутоинфекций.
Большое значение в патогенезе стрептококковых инфекций имеет предварительная сенсибилизация - как следствие ранее перенесенного заболевания стрептококковой этиологии.
При проникновении в кровяное русло стрептококки обусловливают тяжело протекающий септический процесс.
Заболевания у человека чаще вызывают β-гемолитические стрептококки серологической группы А. Они продуцируют ферменты патогенности: гиалуронидазу, фибринолизин (стрептокиназу), дезоксирибонуклеазу и др. Кроме того, у стрептококков обнаруживают капсулу, М-протеин, обладающие антифагоцитарными свойствами.
Стрептококки вызывают у человека различные острые и хронически протекающие инфекции, как с образованием гноя, так и не нагноительные, различающиеся по клинической картине и патогенезу. Нагноительные - флегмоны, абсцессы, раневые инфекции, ненагноительные - острые инфекции верхних дыхательных путей, рожистое воспаление, скарлатина, ревматизм и др.
Стрептококки часто вызывают вторичные инфекции при гриппе, кори, коклюше и других заболеваниях и нередко осложняют раневые инфекции.
Иммунитет. По характеру иммунитет - антитоксический и антибактериальный. Постинфекционный антимикробный иммунитет малонапряженный. Это объясняется слабой иммуногенностью стрептококков и большим количеством сероваров, не дающих перекрестного иммунитета. Кроме этого, при стрептококковых заболеваниях наблюдается аллергизация организма, чем объясняют склонность к рецидивам.
Профилактика. Сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям, укреплению общей резистентности организма. Специфическая профилактика не разработана.
Лечение. Применяют антибиотики. Чаще используют пенициллин, к которому стрептококки не приобрели устойчивости, а также эритромицин и тетрациклин.
Значение стрептококка в этиологии ревмокардита. Патогенез ревмокардитов изучен недостаточно. Но в пользу роли стрептококка в развитии этого заболевания говорит ряд фактов:
1. У больных ревмокардитом из зева высевают В-гемолитический стрептококк.
2. Ревматизм часто возникает после перенесенной ангины, тонзиллитов, фарингитов, сенсибилизирующих организм.
3. В сыворотке крови больных обнаруживают антистрептолизин, антистрептогиалуронидазу - антитела к стрептококковым ферментам, токсинам.
4. Косвенным подтверждением роли стрептококка является успешное лечение пенициллином.
В последнее время в возникновении хронических форм ревмокардита придают значение L-формам стрептококка.
Профилактика обострений ревмокардита сводится к предупреждению стрептококковых заболеваний (например, весной и осенью проводят профилактический курс введения пенициллина). Лечение сводится к применению антибактериальных препаратов - пенициллина.
Значение стрептококка в этиологии скарлатины. Г. Н. Габричевский (1902) впервые высказал предположение о том, что гемолитический стрептококк является возбудителем скарлатины. Но так как стрептококки, выделяемые при других заболеваниях, не отличались от возбудителей скарлатины, то это мнение не всеми разделялось. В настоящее время установлено, что скарлатину вызывают стрептококки группы А, вырабатывающие эритрогенный токсин.
У переболевших возникает иммунитет - стойкий, антитоксический. Его напряженность определяют постановкой реакции Дика - внутрикожным введением эритрогенного токсина. У не болевших вокруг места введения возникают гиперемия и отек, что характеризуется как положительная реакция (отсутствие антитоксина в сыворотке крови). У переболевших такая реакция отсутствует, так как образовавшийся у них антитоксин нейтрализует эритрогенный токсин.
Профилактика. Изоляция, госпитализация. Контактным, ослабленным детям вводят гамма-глобулин. Специфическая профилактика не разработана.
Лечение. Используют пенициллин, тетрациклин. В тяжелых случаях вводят антитоксическую сыворотку.
Микробиологическое исследование
Цель исследования: выявление стрептококка и определение его серовара.
1. Слизь из зева (ангина, скарлатина).
2. Соскоб с пораженного участка кожи (рожа, стрептодермия).
5. Кровь (подозрение на сепсис; эндокардит).
Способы сбора материала
Пить костный бульон – это новый тренд в сфере здорового питания, все хотят его пить и получать от него пользу. Что такое костный бульон, зачем его нужно пить, какие он приносит преимущества?
Костный бульон – это новая ультрамодная еда, напиток ассоциируется со здоровьем и самыми свежими тенденциями в мире здорового питания. Отвар из косточек связывают со здоровьем всего тела – от кишечника и до иммунитета. Специалисты в области здравоохранения и питания данную тенденцию одобряют, она распространена во всем мире. В Нью-Йорке даже открыли магазин костного бульона, он называется Brodo, и его популярность догоняет Старбакс.
Костный бульон готовят из косточек, мясных, птичьих или рыбьих, варится он от 24 до 72 часов на медленном огне. В этот питательный напиток можно добавить овощи или травы, тогда он станет не только полезным, но и вкусным. Чем полезен костный бульон? Что все нашли в этом напитке?
Здоровье кишечника
Костный бульон помогает при любых расстройствах кишечника, даже при синдроме кишечной проницаемости, когда стенки органа работают неправильно. Регулярное употребление этого суперпродукта помогает победить некоторые пищевые непереносимости.
Исцеление соединительных тканей
Костный бульон – это тот же самых глюкозамин, который уже много лет используется для восстановления суставов. Принимать глюкозамин в таблетках или капсулах приходится по вкусу не каждому, а костный отвар на похож на лекарство, но выполняет ту же роль.
В костном бульоне содержится сульфат хондроитина, это вещество оберегает соединительные ткани от заболеваний, к примеру, от остеоартрита.
Молодость и красота
Для того, чтобы коллаген присутствовал в коже, он должен входить в питание. Костный бульон будет поставлять коллаген, это защита молодости от возрастных изменений. Отвар из костей сделает кожу более эластичной, и даже поможет избавиться от мелких морщинок.
Улучшение сна
Среди прочих полезных веществ в костном отваре присутствует глицин. Эта аминокислота помогает победить усталость в течение дня и подарит крепкий глубокий сон ночью.
Укрепление иммунитета
Когда человек болеет, он пьет куриный бульон, чтобы поскорее поправиться. Отвар из косточек – это улучшенная альтернатива бульона, в нем много минералов, в том числе и цинк, они служат для укрепления иммунитета.
Повышение прочности костей
Из костей в бульон переходят кальций, магний и фосфор, они попадают в организм человека и укрепляют его костную систему. Таким образом минералы из костей животных переходят в кости человека, повышая их прочность.
Сбалансированность рациона
Большинство людей не могут похвастаться сбалансированностью своего рациона, многие редко едят мясо, по причине чего страдают от недостатка аминокислот. Костный бульон компенсирует недостаток аминокислот всего одной порцией, мышцы начинают активнее восстанавливается, что открывает новые перспективы в спорте.
Цель исследования: выявление стрептококка и определение его серовара.
Материал для исследования
1. Слизь из зева (ангина, скарлатина).
2. Соскоб с пораженного участка кожи (рожа, стрептодермия).
5. Кровь (подозрение на сепсис; эндокардит).
Способы сбора материала
Способы сбора материала
Основные методы исследования
Ход исследования
Первый день исследования
Первый день исследования
Второй день исследования
Вынимают чашки из термостата и просматривают. При наличии подозрительных колоний из части их делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении в мазке стрептококков часть оставшейся колонии пересевают в пробирки на агар с сывороткой для выделения чистой культуры и на бульон с кровью в пробирках. К концу дня 5-6-часовую культуру из бульона или агара пересевают на бульон Мартена с 0,25% глюкозы для определения серологической группы в реакции преципитации по Ленсфильд. Пробирки и флаконы помещают в термостат и оставляют до следующего дня.
Третий день исследования
Вынимают посевы из термостата, проверяют чистоту культуры на скошенном агаре, делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии чистой культуры стрептококка производят посев на среды Гисса (лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу и маннит), молоко, желатин, 40% желчь и ставят в термостат.
Просматривают бульон Мартена. При наличии специфического роста ставят реакцию преципитации по Ленсфильд для определения серологической группы.
Постановка реакции преципитации по Ленсфильд. Суточную культуру, выросшую на бульоне Мартена, разливают в несколько центрифужных пробирок, центрифугируют в течение 10-15 мин (3000 об/мин).
Надосадочную жидкость сливают в банку с дезинфицирующим раствором, а осадок заливают стерильным изотоническим раствором натрия хлорида и вновь центрифугируют. К осадку, собранному из всех центрифужных пробирок, прибавляют 0,4 мл 0,2% хлороводородной кислоты. Затем пробирку помещают в водяную баню и кипятят 15 мин, периодически встряхивая. После кипячения полученную взвесь вновь центрифугируют. Антиген при этом экстрагируется в надосадочную жидкость, которую сливают в чистую пробирку и нейтрализуют 0,2% раствором гидроксида натрия до рН 7,0-7,2. В качестве индикатора прибавляют бромтимоловый голубой (0,01 мл 0,04% раствора). При указанной реакции цвет меняется от соломенно-желтого до голубого.
Затем в 5 преципитационных пробирок разливают по 0,5 мл антистрептококковых групповых сывороток, которые готовят иммунизацией кроликов (см. главу 19). В 1-ю пробирку вносят сыворотку А, во 2-ю - сыворотку В, в 3-ю - сыворотку С, в 4-ю - сыворотку D, в 5-ю - изотонический раствор натрия хлорида (контроль). После этого пастеровской пипеткой во все пробирки по стенке осторожно наслаивают полученный экстракт (антиген).
При положительной реакции в пробирке с гомологичной сывороткой на границе экстракта с сывороткой образуется тонкое молочно-белое кольцо (рис. 38).
Рис. 38. Схема выделения и идентификации стрептококка
Четвертый день исследования
Производят учет результатов (табл. 25).
Таблица 25. Ферментативные свойства стрептококка
Примечание. к - расщепление углеводов с образованием кислоты.
В настоящее время определяют дезоксирибонуклеазу, а также антистрептогиалуронидазу, антистрептолизин-О.
1. Какие основные методы лабораторного исследования для выявления стрептококков Вы знаете?
2. Для чего ставят реакцию преципитации по Ленсфильд?
3. Почему антиген при постановке этой реакции должен быть прозрачным? Опишите технику постановки этой реакции.
Получите у преподавателя антистрептококковыс сыворотки А, В, С, D и изотонический раствор натрия хлорида. Поставьте реакцию преципитации, результаты покажите преподавателю и зарисуйте.
Питательные среды
Агар с кровью (см. главу 7).
Агар с сывороткой (см. главу 7).
Среды Гисса (сухие).
Мясопептонный желатин (МПЖ). К 100 мл МПБ прибавляют 10-15 г мелко нарезанного желатина. Желатин должен набухать при медленном нагревании в водяной бане (при температуре 40-50° С). К расплавленному желатину прибавляют 10% раствор натрия карбоната (питьевая сода) и устанавливают рН 7,0. Затем сразу фильтруют через складчатый фильтр. Фильтрование идет медленно. Для ускорения процесса фильтрацию можно производить в горячем автоклаве. Профильтрованную среду разливают в пробирки по 6-8 мл и стерилизуют. Стерилизацию производят либо дробно при температуре 100° С 3 дня подряд, либо одномоментно при 110° С 20 мин в автоклаве. Охлаждение среды производят в пробирках, поставленных вертикально.
Приготовление молока. Свежее молоко доводят до кипения, ставят в прохладное место на сутки, освобождают от сливок, вновь кипятят. Оставляют на сутки и снимают верхний слой. Обезжиренное молоко фильтруют через слой ваты, затем подщелачивают 10% раствором натрия карбоната до рН 7,2 и разливают в пробирки по 5-6 мл.
Бульон Мартена. К мясной воде прибавляют равное количество пептона Мартена (фарш из свиных желудков, подвергшихся воздействию хлороводородной кислоты). Полученную смесь кипятят 10 мин, подщелачивают 10% раствором гидроксида натрия до рН 8,0, добавляют 0,5 натрия ацетата, вновь кипятят и разливают в стерильную посуду. К бульону Мартена прибавляют 0,25% глюкозы.
Среда Китта - Тароцци (см. главу 34).
Streptococcus pneumoniae (пневмококк)
Пневмококки впервые описаны Р. Кохом (1871).
Морфология. Пневмококки - это диплококки, у которых стороны клеток, обращенные друг к другу, уплощены, а противоположные стороны вытянуты, поэтому они имеют ланцетовидную форму, напоминающую пламя свечи (см. рис. 4). Размер пневмококков 0,75-0,5 × 0,5-1 мкм, располагаются они парами. В жидких питательных средах часто образуют короткие цепочки, приобретая сходство со стрептококками. Превмококки неподвижны, не имеют спор, в организме образуют капсулу, окружающую оба кокка. В капсуле содержится термоустойчивое вещество антифагин (защищающий пневмококк от фагоцитоза и действия антител). При росте на искусственных питательных средах пневмококки утрачивают капсулу. Пневмококки грамположительны. В старых культурах встречаются грамотрицательные бактерии.
Культивирование. Пневмококки - факультативные анаэробы. Растут при температуре 36-37° С и рН среды 7,2-7,4. Они требовательны к средам, так как не могут синтезировать многие аминокислоты, поэтому растут только на средах с добавлением нативного белка (крови или сыворотки). На агаре с сывороткой образуют мелкие, нежные, довольно прозрачные колонии. На агаре с кровью вырастают влажные колонии зеленовато-серого цвета, окруженные зеленой зоной, что является результатом перехода гемоглобина в метгемоглобин. Пневмококки хорошо растут в бульоне с добавлением 0,2% глюкозы и в бульоне с сывороткой. Рост в жидких средах характеризуется диффузным помутнением и пылевидным осадком на дне.
Ферментативные свойства. Пневмококки обладают довольно выраженной сахаролитической активностью. Они расщепляют: лактозу, глюкозу, сахарозу, мальтозу, инулин с образованием кислоты. Не ферментируют маннит. Протеолитические свойства у них выражены слабо: молоко они свертывают, желатин не разжижают, индол не образуют. Пневмококки растворяются в желчи. Расщепление инулина и растворение в желчи является важным диагностическим признаком, отличающим Streptococcus pneumoniae от Streptococcus pyogenes.
Факторы патогенности. Пневмококки продуцируют гиалуронидазу, фибринолизин и др.
Токсинообразование. Пневмококки образуют эндотоксин, гемолизин, лейкоцидин. Вирулентность пневмококков связана также с наличием в капсуле антифагина.
Антигенная структура и классификация. В цитоплазме пневмококков имеется общий для всей группы протеиновый антиген, а в капсуле - полисахаридный антиген. По полисахаридному антигену все пневмококки разделяют на 84 серовара. Среди патогенных для человека наиболее часто встречаются I, II, III серовары.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Пневмококки относятся к группе нестойких микроорганизмов. Температура 60° С губит их через 3-5 мин. К низким температурам и высушиванию они довольно устойчивы. В высушенной мокроте сохраняют жизнеспособность до 2 мес. На питательной среде они сохраняются не более 5-6 дней. Поэтому при культивировании необходимо делать пересевы через каждые 2-3 дня. Обычные растворы дезинфицирующих веществ: 3% фенол, сулема в разведении 1:1000 губят их через несколько минут.
Особенно чувствительны пневмококки к оптохину, который убивает их в разведении 1:100000.
Восприимчивость животных. Естественным хозяином пневмококков является человек. Однако пневмококки могут вызвать заболевания у телят, ягнят, поросят, собак и обезьян. Из экспериментальных животных к пневмококку высокочувствительны белые мыши.
Источники инфекции. Больной человек и бактерионоситель.
Пути передачи. Воздушно-капельный путь, может быть воздушно-пылевой.
Заболевания у человека. Пневмококки могут вызвать гнойно-воспалительные заболевания разной локализации. Специфическими для пневмококков являются:
1) крупозная пневмония;
2) ползучая язва роговицы;
Наиболее частым заболеванием является крупозная пневмония, захватывающая одну, реже две или три доли легкого. Заболевание протекает остро, сопровождается высокой температурой, кашлем. Заканчивается обычно критически.
Иммунитет. После перенесенного заболевания остается нестойкий иммунитет, так как пневмония характеризуется рецидивами.
Профилактика. Сводится к санитарно-профилактическим мероприятиям. Специфическая профилактика не разработана.
Лечение. Используют антибиотики - пенициллин, тетрациклин и др.
Контрольные вопросы
1. Морфология пневмококков. Культивирование и ферментативные свойства.
2. Какие факторы обусловливают патогенность пневмококков и что защищает пневмококки от фагоцитоза?
3. Что является основными воротами пневмококковой инфекции. Какие заболевания вызывают пневмококки?
Читайте также: