Посев на сахарном бульоне
Посев раневого отделяемого непосредственно с тампона производят на питательные среды в следующем порядке.
1. Кровяной агар.
2. Сахарный бульон.
3. Среда для анаэробов. Тампон оставляют в пробирке.
Посев на чашку производится методом «тампон-петля»: тампоном проводится дорожка по диаметру чашки, затем параллельно первой еще одна дорожка в обратном направлении, после этою материал рйссевается петлей штрихами, перпендикулярными дорожке, ч то позволяет выделить микроорганизмы из ассоциации.
Схема посева раневого отделяемого методом «тампон-петля»
Кусочки тканей засевают на«среду для контроля стерильности» и сахарный бульон.
Посевы инкубируют аэробно и анаэробно при 37°С, просматривая ежедневно. При появлении роста на плотной среде изучают морфологию колоний. Дастся количественная оценка роста. В случаях выявления колоний различной морфологии подсчитывают число колоний каждого вида микроорганизмов. При этом выявляют ведущий вид в ассоциации. По 2—3 колонии каждого типа отсевают на соответствующие питательные среды для дальнейшей идентификации.
При появлении роста в жидких питательных средах готовят мазки (окраска по Граму), с сахарного бульона производят посевы на кровяной агар, среду Эндо, молочно-сопевой агар
Отрицательный результат исследования выдают через 5 сут при отсутствии роста на всех питательных средах.
Интерпретация полученных данных обычно не представляет трудностей, так как при условии соблюдения правил асептики во время взятия патологического материала и из закрытых полостей, и из глубины гнойных ран (очаги инфекции) выделенные микроорганизмы являются возбудителями данного инфекционного процесса.
При выделении ассоциаций микроорганизмов из раневого отделяемого ведущее значение в течение раневого процесса следует отдавать видам, количественно преобладающим в данном микроценозе. Имеются следующие критерии количественной оценки микробного роста при прямом штриховом посеве тампоном раневого отделяемого на плотную питательную среду.
• I — очень скудный рост (10) 1 мк/мл)— рост только в жидких средах, на плотной питательной среде рост отсутствует:
• И—небольшое количество(10) 3 мк/мл)— на плотной среде рост до
• III - умеренное количество (10) 5 мк/мл)-- на плот ной среде рост от
11 до 100 колоний;
• IV — большое количество (10) 7 мк/мл)— рост на плотной среде более 100 колоний.
Показано, что уровень обсемененности тканей в ране, равный 10 5 КОЕ/г, является критическим. Превышение этого уровня указывает на большую вероятность развития гнойной инфекции и возможность генерализации инфекционного процесса. При обсемененности менее 10 5 КОЕ/г ткани раны заживают без явлений нагноения.
Количественная оценка микробной обсемененности жидких проб (КОРУ мл) имеет особое значение при повторных исследованиях, так как характеризует динамику течения гнойно-воспалительного процесса, являясь показателем эффективности терапевтических мероприятий.
санитарного врача СССР
31 декабря 1982 г. N 2657
ПО САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОМУ КОНТРОЛЮ
НА ПРЕДПРИЯТИЯХ ОБЩЕСТВЕННОГО ПИТАНИЯ И ТОРГОВЛИ
Настоящие Методические указания предназначены для использования учреждениями Государственного санитарного надзора.
Методические указания подготовили:
Отдел гигиены питания ГСЭУ МЗ СССР (Л.В. Селиванова).
Институт питания АМН СССР, лаборатория санитарно-пищевой микробиологии (И.Б. Куваева, В.И. Бугрова, С.А. Шевелева).
Санитарно-эпидемиологическая станция г. Москвы, лаборатория санитарной бактериологии (Т.М. Федорова).
ЦОЛИУВ МЗ РСФСР, кафедра гигиены питания (И.А. Карплюк, В.И. Попов).
B. Посев на шоколадный агаp
C. Посев на сpеду Сабуpо
D. Посев на сpеду Эндо
E. Посев на сpеду Бучина
Answer: a - правильный ответ
29. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Staphylococcus aureus для получения чистой культуpы пpоизводится пеpесев на:
A. сpeду Клиглеpа
B. желчный бульон
C. скошенный мясопептонный агаp
D. скошенный агаp Сабуpо
E. скошенный шоколадный агаp
Answer: c - правильный ответ
30. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Escherichia coli для получения чистой культуpы пpоизводится пеpесев на:
A. сpеду Клиглеpа
B. желчный бульон
C. скошенный мясопептонный агаp
D. скошенный агаp Сабуpо
E. скошенный шоколадный агаp
Answer: a - правильный ответ
31. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Enterococcus pyogenes для получения чистой культуpы пpоизводится пеpесев на:
A. скошенный мясопептонный агаp
B. скошенный агаp Сабуpо
C. скошенный шоколадный агаp
D. свеpнутую сывоpотку
E. сахаpный бульон
Answer: e - правильный ответ
32. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Enterococcuss faecalis для получения чистой культуpы пpоизводится пеpесев на:
A. свеpнутую сывоpотку
B. сахаpный бульон
C. скошенный агаp Сабуpо
D. скошенный мясопептонный агаp
E. скошенный шоколадный агаp
Answer: d - правильный ответ
33. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Candida albicans для получения чистой культуpы пpоизводится пеpесев на:
A. сpеду Клиглеpа
B. желчный бульон
C. скошенный мясопептонный агаp
D. скошенный агаp Сабуpо
E. скошенный шоколадный агаp
Answer: d - правильный ответ
34. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Klebsiella pneumoniae для получения чистой культуpы пpоизводится пеpесев на:
A. скошенный агаp Сабуpо
B. сpеду Клиглеpа
C. скошенный мясопептонный агаp
D. желчный бульон
E. скошенный шоколадный агаp
Answer: b - правильный ответ
35. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Klebsiella pneumoniae идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки,хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
d. Г+кокки,pасположенные цепочкой
e. Г+кокки,pасположенные скоплениями в виде гpозди виногpада
Answer: a - правильный ответ
36. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Staphylococcus epidermidis идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки,хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
d. Г+кокки,pасположенные цепочкой
e. Г+кокки,pасположенные скоплениями в виде гpозди виногpада
Answer: e - правильный ответ
37. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Staphylococcus aureus идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки,хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
d. Г+кокки,pасположенные цепочкой
e. Г+кокки,pасположенные скоплениями в виде гpозди виногpада
Answer: e - правильный ответ
38. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Staphylococcus saprophyticus идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
d. Г+кокки,pасположенные скоплениями в виде гpозди виногpада
e. Г+кокки,pасположенные цепочкой
Answer: d - правильный ответ
39. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Streptococcus pyogenes идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
d. Г+кокки,pасположенные цепочкой
e. Г+кокки,pасположенные скоплениями в виде гpозди виногpада
Answer: d - правильный ответ
40. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Streptococcus pneumonia идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки,хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
d. Г+кокки,pасположенные цепочкой
e. Г+кокки,pасположенные паpами
Answer: e - правильный ответ
41. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Enterococcus faecalis идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки,хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+окpугленные клетки
d. Г+кокки,pасположенные паpами
e. Г+палочки без поp
Answer: d - правильный ответ
42. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Escherichia coli идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки хаотично pасположенные
B. Г-pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
D. Г-кокки,pасположенные цепочкой
e. Г+кокки,pасположенные скоплениями в виде гpозди виногpада
Answer: a - правильный ответ
43. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Candida albicans идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки,хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
d. Г+окpуглые клетки
e. Г+кокки,pасположенные скоплениями в виде гpозди виногpада
Answer: d - правильный ответ
44. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Bacteroeides идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки,хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
d. Г+окpуглые клетки
e. Г+кокки,pасположенные скоплениями в виде гpозди виногpада
Answer: a - правильный ответ
45. Пpи лабоpатоpной диагностике гнойно-септической инфекции,вызванной Clostridium perfringens идентификацию по моpфологическим пpизнакам пpоводим:
A. Г-палочки,хаотично pасположенные
B. Г-кокки,pасположенные по одиночке
c. Г+палочки со споpами
d. Г+окpуглые клетки
e. Г+кокки,pасположенные скоплениями в виде гpозди виногpада
Answer: c - правильный ответ
46. Какой возбудитель дает положительный тест на лецитоветилазу:
A. Enterocjccus faecalis
B. Escherichia coli
C. Staphylococcus aureus
D. Hafnia
E. Streptococcus pneumonia
Answer: c - правильный ответ
47. Какой возбудитель обpазует вета гемолиз на кpовяном агаpе:
A. Hafnia
B. Staphylococcus saprophyticus
C. Staphylococcus aureus
D. Enterobacter
E. Streptococcus pneumonia
Answer: c - правильный ответ
48. Какой возбудитель обpазует бета гемолиз на кpовяном агаpе:
A. Enterobacter
B. Staphylococcus epidermidis
C. Hafnia
D. Streptococcus pyogenes
E. Streptococcus pneumonia
Answer: d - правильный ответ
49. Какой возбудитель обpазует алфа2 гемолиз на кpовяном агаpе:
A. Enterocjccus faecalis
B. Escherichia coli
C. Hafnia
D. Streptococcus pyogenes
E. Streptococcus pneumonia
Answer: e - правильный ответ
50. Какой возбудитель дает положительный тест на плазмокоагулазу:
A. Hafnia
B. Streptococcus pneumonia
C. Staphylococcus aureus
D. Staphylococcus saprophyticus
E. Candida albicans
Answer: c - правильный ответ
51. Какой возбудитель дает положительный тест на феpментацию манита в анаэpовных условиях:
A. Escherichia coli
B. Hafnia
C. Staphylococcus aureus
D. Staphylococcus epidermidis
E. Streptococcus pneumonia
Answer: c - правильный ответ
52. Какой возбудитель pазлагает глюкозу до кислоты и газа,лактозу до кислоты без обpазования сеpоводоpода на сpеде Клиглеpа:
A. Staphylococcus aureus
B. Pseudomonas aeruginosa
C. Streptococcus pneumonia
D. Candida albicans
E. Escherichia coli
Answer: e - правильный ответ
53. Какой вид возбудителя из pода Кандида феpментиpует глюкозу и мальтозу с обpазованием кислоты:
A. Candida tropicalis
B. Candida krusei
C. Candida pseudotropicalis
D. Candida albicans
Answer: d - правильный ответ
54. Какой возбудитель pазлагает инулин и лизиpуется 10% желчным бульоном:
Питательные среды: питательный агар;¦ 5% кровяной агар; сахарный бульон. ¦
Выделение микроорганизмов из мочи (качественное исследование) не позволяет отдифференцировать бактериурию, возникающую в результате загрязнения мочи нормальной микрофлорой дистального отдела уретры, от бактериурии, развивающейся при инфекционных процессах в мочевыводящей системе, возбудителями которых являются условно-патогенные микроорганизмы. С этой целью применяют количественные методы исследования, основанные на определении числа микробных клеток в 1 мл мочи (степень бактериурии).
Метод секторных посевов. Платиновой петлей, диаметром 2 мм, емкостью 0,005 мл, производят посев мочи (30-40 штрихов) на сектор А чашки Петри с простым питательным агаром. После этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор I и аналогичным образом - из сектора I во II и из II в III. Чашки инкубируют при 37 град. С 18-24 часа, после чего подсчитывают число колоний, выросших в разных секторах. Определение степени бактериурии по количеству выделенных колоний производят согласно таблице 1.
| А | Количество колоний в секторах | Количесво бактерий в 1 мл мочи | ||
| I | II | III | ||
| 1-6 | - | - | - | Менее 1000 |
| 8-20 | - | - | - | |
| 20-30 | - | - | - | |
| 30-60 | - | - | - | |
| 70-80 | - | - | - | |
| 100-150 | 5-10 | - | - | |
| не сосчитать | 20-30 | - | - | |
| не сосчитать | 40-60 | - | - | 1 000000 |
| не сосчитать | 100-140 | 10-20 | - | 5 000000 |
| не сосчитать | не сосчитать | 30-40 | - | 10 000000 |
| не сосчитать | не сосчитать | 60-80 | единичные колонии | 100 000000 |
Метод секторных посевов позволяет не только определить степень бактериурии, но и выделить возбудителя заболевания в чистой культуре.
При латентном течении уроинфекции, а также после лечения антибактериальными препаратами рекомендуется производить посев по 0,1 мл цельной мочи на плотные питательные среды и в пробирку с 0,25% сахарным бульоном. Посевы инкубируют при 37 град. С 24 часа. При отсутствии роста на 5% кровяном агаре чашки выдерживают 3 суток в термостате, т.к. может наблюдаться замедленный рост стрептококков.
Подсчитывают количество колоний, выросших на плотных питательных средах, и пересчитывают обсемененность на 1 мл мочи. Из сахарного бульона делают высев на чашку с 5% кровяным агаром. Колонии, выросшие на плотных питательных средах, отсевают в пробирки со скошенным агаром, выделенную чистую культуру идентифицируют и определяют ее чувствительность к антибактериальным препаратам.
Ускоренные методы основаны на определении продуктов метаболизма, образующихся при размножении микроорганизмов в моче. Они дают менее точные результаты, чем метод секторных посевов, и чаще используются при массовых профилактических обследованиях больших контингентов людей, для экспресс - диагностики. При положительном результате, полученном ускоренными методами, необходимы дальнейшие исследования с помощью более точного метода секторных посевов.
При использовании ускоренных методов лаборатория дает предварительный ответ через день после получения результатов определения степени бактериурии и окончательный - через 4 дня: после выделения чистой культуры микроорганизмов, их идентификации и определения чувствительности к антибактериальным препаратам.
Нитритный тест. Нитриты, являющиеся продуктами метаболизма представителей семейства Enterobacteriaceae, могут быть обнаружены в моче с помощью реактива Грисса. Готовят два раствора: 1,25 г сульфаниловой кислоты растворяют в 500 мл 30% уксусной кислоты; 2,5 г альфа - нафтиламина растворяют в 500 мл 30% уксусной кислоты.
Оба раствора хранят в защищенном от света месте. Непосредственно перед исследованием оба раствора смешивают в равных количествах, 1 мл смеси добавляют к 1 мл мочи. Появление красного окрашивания свидетельствует о присутствии в 1 мл мочи не 10 5 микробных клеток.
Эффективность метода может быть значительно повышена добавлением в мочу нитратов с последующей инкубацией при 37 0 С в течение 2-4 часов перед постановкой нитритного теста.
ТТХ-тест. Трифенилтетразолий хлористый ( тале-ТТХ) под действием продуктов жизнедеятельности микроорганизмов переходит из бесцветного в красный нерастворимый в воде трифенилформазан. Интенсивность окраски находится в прямой зависимости от степени бактериурии.
Готовят три раствора: 1. Насыщенный раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия; 2. 750 мг ТТХ растворяют в 100 мл раствора 1; 3. Рабочий раствор - 4 мл раствора 1 смешивают со 100 мл раствора 2. Хранят растворы в прохладном, защищенном от света месте. Срок хранения растворов 1 и 2 - до 2-х месяцев, рабочего раствора - не более 2-х недель.
К 2 мл мочи прибавляют 0,5 мл рабочего раствора и помещают после перемешивания в термостат при 37 0 С. После 4-х часовой инкубации учитывают результаты. Появление на дне пробирки красного осадка свидетельствует о наличии в 1 мл мочи не менее 10 5 микробных клеток.
Оценка результатов исследования.
Основной задачей при интерпретации полученных данных является доказательство этиологической роли условно - патогенных микроорганизмов. Учитывают комплекс тестов: степень бактериурии, вид выделенных культур, повторность их выделения в процессе заболевания, присутствие в моче монокультуры или ассоциации микроорганизмов.
Степень бактериурии позволяет дифференцировать инфекционный процесс в мочевых путях от контаминации мочи нормальной микрофлорой. С этой целью используют следующие критерии: степень бактериурии, не превышающая 10 микробных клеток в 1 мл мочи, свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса и обычно является результатом контаминации мочи; степень бактериурии, равная 10 4 микробных клеток в 1 мл мочи, расценивается как сомнительный результат, исследование следует повторить; степень бактериурии, равная и выше 10 5 микробных клеток в 1 мл мочи, указывает на наличие воспалительного процесса.
Изменение степени бактериурии в процессе заболевания может быть использовано для контроля за течением процесса и эффективностью терапии: уменьшение степени бактериурии свидетельствует о благоприятном течении заболевания и эффективности использованных лекарственных препаратов.
Следует иметь в виду, что в некоторых случаях - у больных, получающих антибактериальную терапию, при плохом оттоке мочи, при низком ее удельном весе и рН ниже 5 - может наблюдаться низкая степень бактериурии при имеющемся заболевании. Поэтому, помимо степени бактериурии, следует изучать вид выделенных из мочи микроорганизмов. Эшерихии, протей, синегнойная палочка, клебсиеллы чаще выделяются из мочи больных уроинфекцией. Дифтероиды, лактобациллы, грамположительные палочки обычно выделяются из мочи здоровых людей.
При трактовке результатов исследования следует учитывать повторность выделения одного и того же вида микроорганизмов: повторное выделение из мочи культуры одного вида, типа, варианта говорит о наличии инфекционного процесса.
Учитывается также присутствие в моче монокультуры или ассоциации микроорганизмов. Монокультура чаще выделяется при острых воспалительных процессах и коррелирует с высокой степенью бактериурии.
Ассоциации микроорганизмов чаще встречаются при хронических процессах и коррелируют с низкой степенью бактериурии.
При окончательной трактовке результатов микробиологического исследования необходимо учитывать данные клиники и другие лабораторные анализы.
В окончательном ответе, который выдается лабораторией, указывается степень бактериурии, вид выделенных культур и их чувствительность к лекарственным препаратам.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Возбудителями гнойно - воспалительных процессов дыхательных путей чаще всего являются условно - патогенные микроорганизмы следующих родов и видов: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, Neisseria, Corynebacterium, Klebsiella, Citrobacter, Proteus, Candida, Actinomyces и др. При направленном исследовании могут быть выделены Mycobacterium tuberculosis и другие микобактерии, Mycoplasma, Bacteroides.
Особенностью микробиологического исследования при инфекциях дыхательных путей является почти обязательное наличие в исследуемом материале нескольких видов микроорганизмов.
В отделяемом зева, трахеи, бронхов, носа в норме обнаруживаются следующие микроорганизмы: Staphylococcus epidermidis, Streptococcus viridans, Neisseria, Corynebacterium, Lactobacillus, Candida и некоторые другие. При носительстве могут быть обнаружены S. aureus, S. pneumonia, S. pyogenes.
Мокрота, проходя через верхние дыхательные пути и полость рта, может контаминироваться вегетирующей в них микрофлорой.
Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.008 сек.)
Сахарный бульон применяют для культивирования широкого круга микроорганизмов. Сахарный агар используют для приготовления кровяного сахарного агара.
Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 43,0 г порошка М084 или 23,0 г порошка М044 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. При желании из Сахарного агара можно получить кровяной сахарный агар. Для этого в стерильный Сахарный агар, остуженный до 50°С, добавить (до 5% об/об) стерильную дефибринированную баранью кровь. Тщательно перемешать и разлить в соответствующие емкости.
Принцип и оценка результата:
Сахарный бульон применяют для культивирования широкого круга микроорганизмов и специально используют для приготовления кровяного сахарного агара (1). Сахарный бульон применяют для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом серийных разведений (2). Этот бульон обладает преимуществом, по сравнению с соево-пептонной средой, особенно при определении чувствительности к неомицину и хлортетрациклину.
Сахарный агар имеет высокую концентрацию глюкозы, являющейся источником энергии для быстрого роста микроорганизмов. Вместе с тем, ввиду высокого содержания углевода среда не очень подходит для определения гемолиза. Мясной экстракт и триптоза служат источником азотистых веществ, серы, углерода, витаминов и солей. Хлорид поддерживает оптимальное осмотическое давление.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю (М084).
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если гель образуется в чашках Петри или пробирках.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор М084 (4,3% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2, М044 (2,3% вес/об) имеет рН 7,2 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.
Посев крови – метод бактериологического исследования, использующийся для достоверного определения наличия бактерий в крови.
Посев используют для выявления в ней различных микроорганизмов приходится делать при многих заболеваниях. Посев крови осуществляют для обособленности, чтобы идентифицировать болезнетворных бактерий при бактериемии.
Бактериемия - это проникновение бактерий в кровь при генерализации инфекции в организме человека, заражении крови (сепсис). Данный вид анализа проводится в лабораториях медицинских учреждений.
Делают посев крови на жидкие питательные среды:
- желчный бульон,
- сахарный бульон,
- жидкие и полужидкие среды для выращивания микробов анаэробов.
Сколько раз нужно сдавать Бак посев крови
Для обнаружения микроорганизмов требуется несколько анализов не менее 3, так как количество бактерий в крови может колеблется.
Определенные виды бактерий можно выделить только специальными бактериологическими посевами (бак посев) крови.
Бак посев крови - что показывает
Бак посев крови показывает чувствительность к антибиотикам той или иной группы бактерий. Определив вид выращенной колоний бактерий после посева, (микробиологического исследования) можно подобрать эффективные антибиотики против именно этой группы микроорганизмов (так называемый посев крови на стерильность).
- Это важно! Перед анализом на посев крови на инфекции - Не принимайте анатибиотики!
Обнаружить бактерии будет трудно или вообще невозможно, если человек перед анализом посева крови принимал антибиотики, при продолжающемся инфицировании болезнетворными микроорганизмами.
Как сдавать кровь на бак посев
Для наиболее точного диагностирования заболеваний недостаточно самого современного лабораторного оборудования.
Точность результатов зависит не только от используемых реактивов и аппаратуры, но и от времени и правильности сбора исследуемого материала. При несоблюдении основных правил подготовки к анализам их результаты могут быть значительно искажены.
Для исследования крови более всего подходят утренние часы
Для большинства исследований кровь берется строго натощак.
Кофе, чай и сок – это тоже еда.
Можно пить воду.
Рекомендуются следующие промежутки времени после последнего приема пищи:
- для общего анализа крови не менее 3-х часов;
- для биохимического анализа крови желательно не есть 12-14 часов (но не менее 8 часов).
За 2 дня до обследования необходимо отказаться от алкоголя, жирной и жареной пищи.
За 1-2 часа до забора крови не курить.
Перед исследованием крови следует максимально снизить физические нагрузки.
- Исключить бег, подъем по лестнице.
- Избегать эмоционального возбуждения.
- Минут10-15 нужно отдохнуть, расслабиться и успокоиться.
Нельзя сдавать кровь сразу после физиотерапевтических процедур, ультразвукового и рентгенологического исследования, массажа и рефлексотерапии.
Перед сдачей крови нужно исключить перепады температур, то есть баню и сауну.
Перед гормональным исследованием крови у женщин репродуктивного возраста следует придерживаться рекомендаций лечащего врача о дне менструального цикла, в который необходимо сдать кровь, так как на результат анализа влияют физиологические факторы фазы менструального цикла.
Перед сдачей крови необходимо успокоиться, чтобы избежать немотивированного выброса в кровь гормонов и увеличение их показателя.
Для сдачи крови на вирусные гепатиты желательно за 2 дня до исследования исключить из рациона цитрусовые, оранжевые фрукты и овощи.
Для правильной оценки и сравнения результатов ваших лабораторных исследований рекомендуется проводить их в одной и той же лаборатории
В разных лабораториях могут применяться разные методы исследования и единицы измерения показателей.
Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности найти и выделеть не только штаммы, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном.
Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).
Посев менструальной крови на туберкулез
Результат оценивается после трехкратного посева. На посев берутся выделения из влагалища, менструальную кровь, соскоб или смыв эндометрия, содержимое очагов воспаления (например, из язв на шейке матки).
Даже проведение трехкратного посева дает низкий процент высеваемости палочек Коха. В дополнение используют ПЦР полученного биологического материала.
Посев крови на грибковые инфекции
Количественную оценку грибковой инфекции можно дать с помощью посева грибков (культуральный метод).
Для таких целей материал с кожи, ногтей или волос собирают, как и в случае микроскопического исследования, далее:
- Биологический материал переносят в специальную питательную среду.
- Если во взятых образцах были грибки, то через некоторое время вырастают колонии.
- Затем колонии изучаются под микроскопом, что позволяет определить род и вид грибка, а также его концентрацию.
Кроме того, возможно и проведение тестов на чувствительность грибков к определенным противогрибковым препаратам, что позволяет подобрать больному оптимальную схему лечения.
Посев крови на аэробные и анаэробные бактерии
Посев крови необходим для определения возбудителя инфекционного процесса. В норме кровь является стерильной и только при определенной части заболеваний, в нее могут проникать микроорганизмы.
Такой тип инфицирования называется бактериемией.
Наиболее тяжелый вариант бактериемии – сепсис (септицемия, септикопиемия), но данное состояние проявляется яркой клинической картиной и в основном является уделом стационаров (в том числе отделения реанимации).
Не всегда наличие возбудителя в крови приводит к сепсису. Возможна даже физиологическая бактериемия (она кратковременная и может возникать, например, при чистке зубов и неосторожном травмировании десен).
И все же, если микроорганизм попал в кровь, необходимо его выделить, определить и выяснить, к каким антимикробным препаратам он может быть чувствителен.
В этом случае применяется посев на аробные и анаэробные бактерии.
Аэробные бактерии имеют зависимость от кислорода (то есть их размножение без кислорода невозможно или возможно, но очень кратковременно).
Анаэробные бактерии в свою очередь имеют способность размножаться и без присутствия вокруг них источников кислорода.
Другое название для посева на аэробные и анаэробные бактерии является посев крови на стерильность.
Как и в любом другом исследовании, посев может быть ложноотрицательным, это связано со спецификой забора крови при данном исследовании (очень часто, забор крови нужно проводить на высоте лихорадки – повышения температуры тела).
Ложноположительный результат – при несоблюдении правил стерильности лабораторного инструментария, что в современных лабораториях крайне недопустимо и обычно такого не происходит.
В некоторых случаях для подтверждения диагноза необходимо использовать трехкратный посев на стерильность, то есть кровь забирается три раза с небольшим промежутком во времени.
После успешного забора крови для посева на аэробные и анаэробные бактерии, данный материал помещают на питательную среду. В течение определенного времени начинается рост колоний бактерий, присутствующих в кровотоке пациента.
При помощи различных лабораторных тестов исследователь проводит идентификацию бактерии, а также выполняет тест на чувствительность к антибактериальным препаратам, что в дальнейшем поможет лечащему врачу назначить наиболее эффективное лечение болезни.
Бак посев крови на стафилококк
Если возникает подозрение, что в теле развивается стафилококк, в первую очередь, не надо паниковать.
Обнаружение стафилококка клиническом посеве в концентрации 10 в 3 степени при бессимптомном носительстве не угрожает человеку. Вам необходимо обратить внитание на укрепление иммунитета.
Для точного определения, стафилококк ли является возбудителем заболевания, у больного берут на исследование биоматериалы. Это может быть кровь, содержимое гнойничков, отходящая мокрота, а в некоторых ситуациях и спинномозговая жидкость.
Значимые показатели анализа – выявление в сыворотке крови антител к антигенам стафилококка. Для этого используют реакцию торможения гемолиза, реакцию пассивной гемагглютинации. Одновременно проверяется чувствительность бактерии к различным противомикробным препаратам, чтобы в последующем сделать правильный выбор лекарства для борьбы с ним.
В случае если человек относится к группе пациентов с повышенным риском стафилококковой инфекции (из-за перенесенных заболеваний, других причин, вызвавших ослабление иммунной системы), врач может рекомендовать прохождение быстрого теста на коагулазу.
Такое тестирование – надежный способ определения кокков в крови. Если он покажет положительный результат – значит возбудителем стал золотистый стафилококк, если отрицательный – эпидермальный или сапрофитный.
Посев крови на гемокультуру - алгоритм
Итак, материалом для бактериологического посева является кровь в количестве 5 – 10 мл, полученная из локтевой вены.
Участок кожи обрабатывается сначала ватным шариком, смоченным в 70 % - ном этиловом спирте, а затем другим ватным шариком, смоченным в 1 – 2 % - ном растворе йода, до полного высыхания кожи.
Алгоритм здесь может быть такой же, как и при заборе крови вакуумными шприцами с той разницей, что вместо пробирки в переходник вставляется гемокультурный флакон.
В месте венепункции йод вытирают спиртом и заклеивают этот участок пластырем. Пластиковую крышку данного флакона отламывают, обеззараживают внутреннюю поверхность крышки 70 % этиловым спиртом.
При температуре 37°С кровь нужно хранить не более 2–х часов!
Лучше всего произвести посев крови на питательную среду сразу после её забора.
Соотношение крови и питательной среды – 1: 10,осторожно перемешать.
Для получения наиболее достоверного результата проведение анализа должно быть как минимум двоекратным из разных рук с интервалом времени в 30 минут.
Достоинства посева крови этим методом
Вышеописанного метода в том, что имеет он адекватную стоимость, высокую информативность, простоту в выполнении, а главное – доступность!
В настоящее время существуют два способа посева крови на питательную среду и определение чувствительности к антибиотикам:
- посев на флору с выявлением чувствительности к широкому спектру антибиотиков;
- посев на флору с выявлением чувствительности к основному спектру антибиотиков.
Видео: Анализ на стерильность крови
Глава 15. Стрептококки
К роду Streptococcus относятся: Streptococcus pyogenes (гемолитический) и Streptococcus pneumoniae (пневмококк). Впервые стрептококки были обнаружены Бильротом (1874), Л. Пастером (1879). Изучены они были Э. Розенбахом (1884).
Streptococcus pyogenes (гемолитический)
Морфология. Стрептококки - это кокки, имеющие шаровидную форму. Диаметр каждого кокка в среднем 0,6-1 мкм, однако для них характерен полиморфизм: встречаются мелкие и крупные кокки, строго шаровидные и овальные. Стрептококки располагаются цепочкой, что является результатом деления их в одной плоскости. Длина цепочек разная. На плотной питательной среде цепочки обычно короткие, на жидких - длинные. Стрептококки неподвижны, не имеют спор (см. рис. 4) Свежевыделенные культуры иногда образуют капсулу. На ультратонких срезах видна микрокапсула, под ней расположена трехслойная клеточная стенка и трехслойная цитоплазматическая мембрана. Грамположительны.
Культивирование. Стрептококки - факультативные анаэробы. Растут при температуре 37° С и рН среды 7,6-7,8. Оптимальными средами для их выращивания являются среды, содержащие кровь или сыворотку крови. На плотных питательных средах колонии стрептококков мелкие, плоские, мутные, сероватого цвета. На агаре с кровью некоторые разновидности стрептококков образуют гемолиз. β-Гемолитические стрептококки образуют четкую зону гемолиза, α-гемолитические стрептококки образуют небольшую зеленоватую зону (результат перехода гемоглобина в метгемоглобин). Встречаются стрептококки, не дающие гемолиза.
На сахарном бульоне стрептококки растут с образованием пристеночного и придонного мелкозернистого осадка, бульон при этом остается прозрачным.
Ферментативные свойства. Стрептококки обладают сахаролитическими свойствами. Они расщепляют глюкозу, лактозу, сахарозу, маннит (не всегда) и мальтозу с образованием кислоты. Протеолитические свойства у них слабо выражены. Они свертывают молоко, желатин не разжижают.
Токсинообразование. Стрептококки образуют ряд экзотоксинов: 1) стрептолизины - разрушают эритроциты (О-стрептолизин обладает кардиотоксическим действием); 2) лейкоцидин - разрушает лейкоциты (образуется высоковирулентными штаммами); 3) эритрогенный (скарлатинозный) токсин - обусловливает клиническую картину скарлатины - интоксикацию, сосудистые реакции, сыпь и пр. Синтез эритрогенного токсина детерминирован профагом; 4) цитотоксины - обладают способностью вызывать гломерулонефрит.
Антигенная структура и классификация. У стрептококков обнаружены различные антигены. В цитоплазме клетки содержится видовой нуклеопротеидной природы антиген - единый для всех стрептококков. На поверхности клеточной стенки расположены протеиновые типовые антигены. В клеточной стенке стрептококков обнаружен полисахаридный групповой антиген.
По составу полисахаридной группоспецифической фракции антигена все стрептококки делятся на группы, обозначаемые большими латинскими буквами А, В, С, D и т. д. до S. Кроме групп, стрептококки разделены на серологические типы, которые обозначаются арабскими цифрами.
Группа А включает 70 типов. В эту группу входит большинство стрептококков, вызывающих различные заболевания у человека. Группа В включает в основном условно-патогенные для человека стрептококки. Группа С включает патогенные для человека и животных стрептококки. Группа D состоит из непатогенных для человека стрептококков, однако в эту группу входят энтерококки, которые являются обитателями кишечного тракта человека и животных. Попадая в другие органы, они обусловливают воспалительные процессы: холециститы, пиелиты и др. Таким образом, их можно отнести к условно-патогенным микробам.
Принадлежность выделенных культур к одной из серологических групп определяют с помощью реакции преципитации с групповыми сыворотками. Для определения серологических типов используют реакцию агглютинации с типоспецифическими сыворотками.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Стрептококки довольно устойчивы в окружающей среде. При температуре 60° С погибают через 30 мин.
В высушенном гное и мокроте они сохраняются месяцами. Обычные концентрации дезинфицирующих веществ губят их через 15-20 мин. Энтерококки значительно устойчивее, дезинфицирующие растворы убивают их только через 50-60 мин.
Восприимчивость животных. К патогенным стрептококкам чувствителен рогатый скот, лошади, собаки, птицы. Из лабораторных животных чувствительны кролики и белые мыши. Однако стрептококки, патогенные для человека, не всегда патогенны для экспериментальных животных.
Источники инфекции. Люди (больные и носители), реже животные или инфицированные продукты.
Пути передачи. Воздушно-капельный и воздушно-пылевой, иногда пищевой, возможен контактно-бытовой.
Заболевания могут возникать в результате экзогенного заражения, а также эндогенно - при активации условно-патогенных стрептококков, обитающих на слизистых оболочках зева, носоглотки, влагалища. Снижение сопротивляемости организма (охлаждение, голодание, переутомление и пр.) может привести к возникновению аутоинфекций.
Большое значение в патогенезе стрептококковых инфекций имеет предварительная сенсибилизация - как следствие ранее перенесенного заболевания стрептококковой этиологии.
При проникновении в кровяное русло стрептококки обусловливают тяжело протекающий септический процесс.
Заболевания у человека чаще вызывают β-гемолитические стрептококки серологической группы А. Они продуцируют ферменты патогенности: гиалуронидазу, фибринолизин (стрептокиназу), дезоксирибонуклеазу и др. Кроме того, у стрептококков обнаруживают капсулу, М-протеин, обладающие антифагоцитарными свойствами.
Стрептококки вызывают у человека различные острые и хронически протекающие инфекции, как с образованием гноя, так и не нагноительные, различающиеся по клинической картине и патогенезу. Нагноительные - флегмоны, абсцессы, раневые инфекции, ненагноительные - острые инфекции верхних дыхательных путей, рожистое воспаление, скарлатина, ревматизм и др.
Стрептококки часто вызывают вторичные инфекции при гриппе, кори, коклюше и других заболеваниях и нередко осложняют раневые инфекции.
Иммунитет. По характеру иммунитет - антитоксический и антибактериальный. Постинфекционный антимикробный иммунитет малонапряженный. Это объясняется слабой иммуногенностью стрептококков и большим количеством сероваров, не дающих перекрестного иммунитета. Кроме этого, при стрептококковых заболеваниях наблюдается аллергизация организма, чем объясняют склонность к рецидивам.
Профилактика. Сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям, укреплению общей резистентности организма. Специфическая профилактика не разработана.
Лечение. Применяют антибиотики. Чаще используют пенициллин, к которому стрептококки не приобрели устойчивости, а также эритромицин и тетрациклин.
Значение стрептококка в этиологии ревмокардита. Патогенез ревмокардитов изучен недостаточно. Но в пользу роли стрептококка в развитии этого заболевания говорит ряд фактов:
1. У больных ревмокардитом из зева высевают В-гемолитический стрептококк.
2. Ревматизм часто возникает после перенесенной ангины, тонзиллитов, фарингитов, сенсибилизирующих организм.
3. В сыворотке крови больных обнаруживают антистрептолизин, антистрептогиалуронидазу - антитела к стрептококковым ферментам, токсинам.
4. Косвенным подтверждением роли стрептококка является успешное лечение пенициллином.
В последнее время в возникновении хронических форм ревмокардита придают значение L-формам стрептококка.
Профилактика обострений ревмокардита сводится к предупреждению стрептококковых заболеваний (например, весной и осенью проводят профилактический курс введения пенициллина). Лечение сводится к применению антибактериальных препаратов - пенициллина.
Значение стрептококка в этиологии скарлатины. Г. Н. Габричевский (1902) впервые высказал предположение о том, что гемолитический стрептококк является возбудителем скарлатины. Но так как стрептококки, выделяемые при других заболеваниях, не отличались от возбудителей скарлатины, то это мнение не всеми разделялось. В настоящее время установлено, что скарлатину вызывают стрептококки группы А, вырабатывающие эритрогенный токсин.
У переболевших возникает иммунитет - стойкий, антитоксический. Его напряженность определяют постановкой реакции Дика - внутрикожным введением эритрогенного токсина. У не болевших вокруг места введения возникают гиперемия и отек, что характеризуется как положительная реакция (отсутствие антитоксина в сыворотке крови). У переболевших такая реакция отсутствует, так как образовавшийся у них антитоксин нейтрализует эритрогенный токсин.
Профилактика. Изоляция, госпитализация. Контактным, ослабленным детям вводят гамма-глобулин. Специфическая профилактика не разработана.
Лечение. Используют пенициллин, тетрациклин. В тяжелых случаях вводят антитоксическую сыворотку.
Микробиологическое исследование
Цель исследования: выявление стрептококка и определение его серовара.
1. Слизь из зева (ангина, скарлатина).
2. Соскоб с пораженного участка кожи (рожа, стрептодермия).
5. Кровь (подозрение на сепсис; эндокардит).
Способы сбора материала
Посев крови – метод бактериологического исследования, использующийся для достоверного определения наличия бактерий в крови.
Посев используют для выявления в ней различных микроорганизмов приходится делать при многих заболеваниях. Посев крови осуществляют для обособленности, чтобы идентифицировать болезнетворных бактерий при бактериемии.
Бактериемия - это проникновение бактерий в кровь при генерализации инфекции в организме человека, заражении крови (сепсис). Данный вид анализа проводится в лабораториях медицинских учреждений.
Делают посев крови на жидкие питательные среды:
- желчный бульон,
- сахарный бульон,
- жидкие и полужидкие среды для выращивания микробов анаэробов.
Сколько раз нужно сдавать Бак посев крови
Для обнаружения микроорганизмов требуется несколько анализов не менее 3, так как количество бактерий в крови может колеблется.
Определенные виды бактерий можно выделить только специальными бактериологическими посевами (бак посев) крови.
Бак посев крови - что показывает
Бак посев крови показывает чувствительность к антибиотикам той или иной группы бактерий. Определив вид выращенной колоний бактерий после посева, (микробиологического исследования) можно подобрать эффективные антибиотики против именно этой группы микроорганизмов (так называемый посев крови на стерильность).
- Это важно! Перед анализом на посев крови на инфекции - Не принимайте анатибиотики!
Обнаружить бактерии будет трудно или вообще невозможно, если человек перед анализом посева крови принимал антибиотики, при продолжающемся инфицировании болезнетворными микроорганизмами.
Как сдавать кровь на бак посев
Для наиболее точного диагностирования заболеваний недостаточно самого современного лабораторного оборудования.
Точность результатов зависит не только от используемых реактивов и аппаратуры, но и от времени и правильности сбора исследуемого материала. При несоблюдении основных правил подготовки к анализам их результаты могут быть значительно искажены.
Для исследования крови более всего подходят утренние часы
Для большинства исследований кровь берется строго натощак.
Кофе, чай и сок – это тоже еда.
Можно пить воду.
Рекомендуются следующие промежутки времени после последнего приема пищи:
- для общего анализа крови не менее 3-х часов;
- для биохимического анализа крови желательно не есть 12-14 часов (но не менее 8 часов).
За 2 дня до обследования необходимо отказаться от алкоголя, жирной и жареной пищи.
За 1-2 часа до забора крови не курить.
Перед исследованием крови следует максимально снизить физические нагрузки.
- Исключить бег, подъем по лестнице.
- Избегать эмоционального возбуждения.
- Минут10-15 нужно отдохнуть, расслабиться и успокоиться.
Нельзя сдавать кровь сразу после физиотерапевтических процедур, ультразвукового и рентгенологического исследования, массажа и рефлексотерапии.
Перед сдачей крови нужно исключить перепады температур, то есть баню и сауну.
Перед гормональным исследованием крови у женщин репродуктивного возраста следует придерживаться рекомендаций лечащего врача о дне менструального цикла, в который необходимо сдать кровь, так как на результат анализа влияют физиологические факторы фазы менструального цикла.
Перед сдачей крови необходимо успокоиться, чтобы избежать немотивированного выброса в кровь гормонов и увеличение их показателя.
Для сдачи крови на вирусные гепатиты желательно за 2 дня до исследования исключить из рациона цитрусовые, оранжевые фрукты и овощи.
Для правильной оценки и сравнения результатов ваших лабораторных исследований рекомендуется проводить их в одной и той же лаборатории
В разных лабораториях могут применяться разные методы исследования и единицы измерения показателей.
Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности найти и выделеть не только штаммы, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном.
Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).
Посев менструальной крови на туберкулез
Результат оценивается после трехкратного посева. На посев берутся выделения из влагалища, менструальную кровь, соскоб или смыв эндометрия, содержимое очагов воспаления (например, из язв на шейке матки).
Даже проведение трехкратного посева дает низкий процент высеваемости палочек Коха. В дополнение используют ПЦР полученного биологического материала.
Посев крови на грибковые инфекции
Количественную оценку грибковой инфекции можно дать с помощью посева грибков (культуральный метод).
Для таких целей материал с кожи, ногтей или волос собирают, как и в случае микроскопического исследования, далее:
- Биологический материал переносят в специальную питательную среду.
- Если во взятых образцах были грибки, то через некоторое время вырастают колонии.
- Затем колонии изучаются под микроскопом, что позволяет определить род и вид грибка, а также его концентрацию.
Кроме того, возможно и проведение тестов на чувствительность грибков к определенным противогрибковым препаратам, что позволяет подобрать больному оптимальную схему лечения.
Посев крови на аэробные и анаэробные бактерии
Посев крови необходим для определения возбудителя инфекционного процесса. В норме кровь является стерильной и только при определенной части заболеваний, в нее могут проникать микроорганизмы.
Такой тип инфицирования называется бактериемией.
Наиболее тяжелый вариант бактериемии – сепсис (септицемия, септикопиемия), но данное состояние проявляется яркой клинической картиной и в основном является уделом стационаров (в том числе отделения реанимации).
Не всегда наличие возбудителя в крови приводит к сепсису. Возможна даже физиологическая бактериемия (она кратковременная и может возникать, например, при чистке зубов и неосторожном травмировании десен).
И все же, если микроорганизм попал в кровь, необходимо его выделить, определить и выяснить, к каким антимикробным препаратам он может быть чувствителен.
В этом случае применяется посев на аробные и анаэробные бактерии.
Аэробные бактерии имеют зависимость от кислорода (то есть их размножение без кислорода невозможно или возможно, но очень кратковременно).
Анаэробные бактерии в свою очередь имеют способность размножаться и без присутствия вокруг них источников кислорода.
Другое название для посева на аэробные и анаэробные бактерии является посев крови на стерильность.
Как и в любом другом исследовании, посев может быть ложноотрицательным, это связано со спецификой забора крови при данном исследовании (очень часто, забор крови нужно проводить на высоте лихорадки – повышения температуры тела).
Ложноположительный результат – при несоблюдении правил стерильности лабораторного инструментария, что в современных лабораториях крайне недопустимо и обычно такого не происходит.
В некоторых случаях для подтверждения диагноза необходимо использовать трехкратный посев на стерильность, то есть кровь забирается три раза с небольшим промежутком во времени.
После успешного забора крови для посева на аэробные и анаэробные бактерии, данный материал помещают на питательную среду. В течение определенного времени начинается рост колоний бактерий, присутствующих в кровотоке пациента.
При помощи различных лабораторных тестов исследователь проводит идентификацию бактерии, а также выполняет тест на чувствительность к антибактериальным препаратам, что в дальнейшем поможет лечащему врачу назначить наиболее эффективное лечение болезни.
Бак посев крови на стафилококк
Если возникает подозрение, что в теле развивается стафилококк, в первую очередь, не надо паниковать.
Обнаружение стафилококка клиническом посеве в концентрации 10 в 3 степени при бессимптомном носительстве не угрожает человеку. Вам необходимо обратить внитание на укрепление иммунитета.
Для точного определения, стафилококк ли является возбудителем заболевания, у больного берут на исследование биоматериалы. Это может быть кровь, содержимое гнойничков, отходящая мокрота, а в некоторых ситуациях и спинномозговая жидкость.
Значимые показатели анализа – выявление в сыворотке крови антител к антигенам стафилококка. Для этого используют реакцию торможения гемолиза, реакцию пассивной гемагглютинации. Одновременно проверяется чувствительность бактерии к различным противомикробным препаратам, чтобы в последующем сделать правильный выбор лекарства для борьбы с ним.
В случае если человек относится к группе пациентов с повышенным риском стафилококковой инфекции (из-за перенесенных заболеваний, других причин, вызвавших ослабление иммунной системы), врач может рекомендовать прохождение быстрого теста на коагулазу.
Такое тестирование – надежный способ определения кокков в крови. Если он покажет положительный результат – значит возбудителем стал золотистый стафилококк, если отрицательный – эпидермальный или сапрофитный.
Посев крови на гемокультуру - алгоритм
Итак, материалом для бактериологического посева является кровь в количестве 5 – 10 мл, полученная из локтевой вены.
Участок кожи обрабатывается сначала ватным шариком, смоченным в 70 % - ном этиловом спирте, а затем другим ватным шариком, смоченным в 1 – 2 % - ном растворе йода, до полного высыхания кожи.
Алгоритм здесь может быть такой же, как и при заборе крови вакуумными шприцами с той разницей, что вместо пробирки в переходник вставляется гемокультурный флакон.
В месте венепункции йод вытирают спиртом и заклеивают этот участок пластырем. Пластиковую крышку данного флакона отламывают, обеззараживают внутреннюю поверхность крышки 70 % этиловым спиртом.
При температуре 37°С кровь нужно хранить не более 2–х часов!
Лучше всего произвести посев крови на питательную среду сразу после её забора.
Соотношение крови и питательной среды – 1: 10,осторожно перемешать.
Для получения наиболее достоверного результата проведение анализа должно быть как минимум двоекратным из разных рук с интервалом времени в 30 минут.
Достоинства посева крови этим методом
Вышеописанного метода в том, что имеет он адекватную стоимость, высокую информативность, простоту в выполнении, а главное – доступность!
В настоящее время существуют два способа посева крови на питательную среду и определение чувствительности к антибиотикам:
- посев на флору с выявлением чувствительности к широкому спектру антибиотиков;
- посев на флору с выявлением чувствительности к основному спектру антибиотиков.
Видео: Анализ на стерильность крови
Цель исследования: выделение и идентификация стафилококков.
Материал для исследования
1. Гной (фурункулы, карбункулы, абсцессы).
2. Слизь из зева (ангина).
3. Мокрота (пневмония).
4. Моча (пиелиты и циститы).
5. Дуоденальное содержимое (холецистит).
6. Кровь (подозрение на сепсис).
7. Рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты (пищевые отравления).
8. Слизь из носа (обследование на бактерионосительство).
Способы сбора материала
Способы сбора материала
Основные методы исследования
Ход исследования
Первый день исследования
Первый день исследования
Все посевы ставят в термостат на сутки.
Обнаружение стафилококков при микроскопии гноя из закрытого абсцесса и осадка мочи, взятой катетером, позволяет дать предварительный положительный ответ: обнаружен стафилококк.
Второй день исследования
Посевы на плотных и жидких питательных средах вынимают из термостата и изучают. Подозрительные в отношении стафилококка колонии, выросшие на желточно-солевом агаре, отсевают на скошенный агар для получения и дальнейшего изучения чистой культуры. При этом учитывают наличие лецитиназы, которое проявляется в образовании радужного венчика вокруг колонии. Чашки с оставшимися колониями оставляют на 2-3 дня при комнатной температуре для выявления пигмента. Просматривают посевы на чашках с агаром, содержащим кровь. Колонии с четкой зоной гемолиза (просветление) вокруг них выделяют на скошенный агар. Посев крови в сахарном бульоне инкубируют 10 сут, производя через 2-3 дня высевы на агар с кровью и желточно-солевую среду.
При отсутствии роста на плотных питательных средах делают высев из бульона с глюкозой на агар с кровью. Посевы ставят в термостат на сутки.
Третий день исследования
Вынимают посевы из термостата. Из выделенных на скошенный агар культур делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии грамположительных стафилококков проводят дальнейшее изучение выделенной культуры:
а) ставят реакцию плазмокоагуляции;
б) изучают гемолитические свойства;
в) определяют продукцию ДНКазы;
г) определяют ферментацию маннита в анаэробных условиях;
д) определяют устойчивость к новобиоцину.
Реакция плазмокоагуляции. Цитратную плазму, полученную из крови кролика, разводят изотоническим раствором натрия хлорида в соотношении 1:4 и наливают в две преципитационные пробирки по 0,3-0,5 мл. В одну пробирку вносят петлю исследуемой культуры, другая пробирка служит контролем. Обе пробирки ставят в термостат при температуре 37° С. Учет реакции производят через 2-3 ч. При отсутствии свертывания плазмы посевы оставляют при комнатной температуре на 24 ч, после чего учитывают реакцию. При наличии фермента коагулазы плазма свертывается (не выливается из перевернутой пробирки). В контрольной пробирке консистенция плазмы не изменяется.
Ускоренный метод определения коагулазы. В стерильной капле воды на предметном стекле суспендируют выделенную культуру, к ней прибавляют одну каплю неразведенной плазмы. При положительной реакции из микробных клеток в течение 20-60 с образуются крупные хлопья. Этот метод используют при массовых обследованиях.
Определение гемолитических свойств. Производят посев на агар с 5% крови (штаммы, продуцирующие α-гемолизин, дают зоны просветления среды и на кроличьей и на бараньей крови, продуцирующие β-гемолизин лизируют только эритроциты барана).
Определение ДНКазы. Исследуемую культуру засевают на среду, содержащую ДНК. Посевы инкубируют. Через 18-20 ч на чашку с выросшими колониями стафилококка добавляют 5-7 мл раствора хлороводородной кислоты. ДНК реагирует с кислотой и среда становится мутной. Если выделенная культура продуцирует фермент ДНКазу, он деполимеризует ДНК и помутнение не образуется.
Расщепление маннита в анаэробных условиях. Исследуемую культуру засевают уколом на полужидкий агар с маннитом. Поверхность среды заливают вазелиновым маслом. Инкубируют 18-24 ч при 37° С. Положительная реакция характеризуется изменением цвета среды (в среде имеется индикатор).
Четвертый день исследования
Производят учет результатов (табл. 24).
Таблица 24. Свойства золотистого стафилококка
Примечание. + положительная реакция.
Наличие перечисленных признаков позволяет отдифференцировать золотистые стафилококки от стафилококков других видов и дать окончательный ответ: выделен S. aureus (рис. 37).
Рис. 37. Схема выделения и идентификации стафилококка
Для установления эпидемиологической цепочки выделенную культуру фаготипируют. Фаготипирование может подтвердить идентичность стафилококков, выделенных от разных больных и из объектов внешней среды.
Для фаготипирования используют критические тест-разведения фагов. Критическим тест-разведением называют то максимальное разведение фагов, при котором происходит полусливной лизис соответствующего штамма стафилококка.
Методика фаготипирования. В чашку Петри наливают 20 мл 1,5% МПА, дают ему застыть и подсушивают в термостате в течение 30-40 мин. На поверхность агара наносят 1 мл 4-6-часовой культуры выделенного стафилококка, распределяют по поверхности всей чашки, избыток жидкости отсасывают или дают ей испариться в термостате в открытой чашке. Предварительно дно чашки делят на секторы или квадраты. Число квадратов или секторов должно соответствовать количеству используемых фагов. Затем на каждый квадрат или сектор наносят один фаг.
Чашки ставят в термостат при температуре 37° С. Результаты определяют через 6-7 ч. Если чашки оставляют при комнатной температуре, то учет фаголизиса производят через 18-24 ч.
Биологические пробы. Проба на определение летальных свойств культуры. Для выявления летального действия токсина кролику вводят внутривенно (или внутрибрюшинно) фильтрат бульонной культуры стафилококка из расчета 0,1-0,2 мл фильтрата на 1 кг массы кролика. Гибель кролика через 3-4 дня свидетельствует о наличии летального действия токсина.
Дермонекротическая проба. Пробу ставят на кролике (наиболее чувствительному к этому токсину животному). Предварительно на боку или на спине животного выщипывают шерсть и вводят внутрикожно 0,2 мл двухмиллиардной взвеси стафилококковой культуры в изотоническом растворе натрия хлорида. При наличии в выделенной культуре некротических свойств в месте введения образуется инфильтрат, сопровождающийся некрозом.
Реакцию учитывают через 24-18 ч.
Полученную культуру стафилококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом бумажных дисков (см. главу 9).
Контрольные вопросы
1. Какой материал исследуют при заболеваниях, вызываемых стафилококками?
2. Каковы основные методы лабораторного исследования для выявления стафилококков?
3. Какова методика постановки реакции плазмокоагуляции?
4. На какой среде выявляют гемолитические свойства стафилококков?
5. С какой целью проводят фаготипирование?
Задание
Проверьте, к какому антибиотику чувствительна выделенная культура стафилококка.
Питательные среды
Желточно-солевой агар Чистовича. Готовят желточную смесь (1 желток куриного яйца на 150 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида). К мясопептонному солевому агару (8-10% натрия хлорида), растопленному и остуженному до 45° С, добавляют 20% желточной взвеси (соблюдают стерильность) и разливают в чашки.
Агар с кровью. См. главу 7.
Солевой бульон, солевой агар. Готовят как обычные среды - МПБ и МПА, только натрия хлорид вносят в большем количестве (8-10%). Бульон разливают в колбы, пробирки, агар - в чашки.
Глава 15. Стрептококки
К роду Streptococcus относятся: Streptococcus pyogenes (гемолитический) и Streptococcus pneumoniae (пневмококк). Впервые стрептококки были обнаружены Бильротом (1874), Л. Пастером (1879). Изучены они были Э. Розенбахом (1884).
Выделение чистых культур аэробов занимает, как правило, три дня и производится по следующей схеме:
1-й день - микроскопия мазка из исследуемого материала, окрашенного (обычно по Граму) - для предварительного ознакомления с микрофлорой, что может быть полезным в выборе питательной среды для посева. Затем посев материала на поверхность застывшего питательного агара для получения изолированных колоний. Рассев можно произвести по методу Дригальского на три чашки Петри с питательной средой. Каплю материала наносят на первую чашку и распределяют шпателем по всей чашке. Затем этим же шпателем распределяют оставшуюся на нем культуру на второй чашке и таким же образом - на третьей. Наибольшее количество колоний вырастет на первой чашке, наименьшее - на третьей. В зависимости от того, сколько было микробных клеток в исследуемом материале, на одной из чашек вырастут изолированные колонии.
Такого же результата можно достигнуть, произведя рассев на одной чашке. Для этого делят чашку на четыре сектора. Исследуемый материал засевают бактериологической петлей штрихами на первом секторе, затем, прокалив и остудив петлю, распределяют посев из первого сектора во второй и таким же образом последовательно в третий и четвертый сектор. Из отдельных микробных клеток после суточного инкубирования в термостате образуются изолированные колонии.
2-й день - изучение колоний, выросших на чашках, описание их. Колонии могут быть прозрачными, полупрозрачными или непрозрачными, они имеют различные размеры, округлые правильные или неправильные очертания, выпуклую или плоскую форму, гладкую или шероховатую поверхность, ровные или волнистые, изрезанные края. Они могут быть бесцветными или иметь белый, золотистый, красный, желтый цвет. На основании изучения этих характеристик выросшие колонии разделяются на группы. Затем из исследуемой группы отбирают изолированную колонию, готовят мазок для микроскопического исследования с целью проверки однородности микробов в колонии. Из этой же колонии производят посев в пробирку со скошенным питательным агаром.
3-й день - проверка чистоты культуры, выросшей на скошенном агаре путем микроскопии мазка. При однородности исследуемых бактерий выделение чистой культуры можно считать законченным.
Для идентификации выделенных бактерий изучаются культуральные признаки, то есть характер роста на жидких и плотных питательных средах. Например, стрептококки на сахарном бульоне образуют придонный и пристеночный осадок, на кровяном агаре - мелкие, точечные колонии; холерный вибрион образует пленку на поверхности щелочной пептонной воды, а на щелочном агаре - прозрачные колонии; палочка чумы на питательном агаре образует колонии в виде «кружевных платочков» с плотным центром и тонкими волнистыми краями, а в жидкой питательной среде - пленку на поверхности, а затем -нити, отходящие от нее в виде «сталактитов».
Выделение чистых культур анаэробных бактерий:
Химические методы заключаются в том, что чашки с посевами анаэробов ставят в герметически закрытый эксикатор, куда помещают химические вещества, например, пирогаллол и щелочь, реакция между которыми идет с поглощением кислорода.
Биологический метод основан на одновременном выращивании анаэробов и аэробов на плотных питательных средах в чашках Петри, герметически закрытых после посева. Вначале кислород поглощается растущими аэробами, а затем начинается рост анаэробов.
Выделение чистой культуры анаэробов начинают с накопления анаэробных бактерий путем посева на среду Китта-Тароцци. В дальнейшем получают изолированные колонии одним из двух способов:
1) посев материала производят путем смешивания с расплавленным теплым сахарным агаром в стеклянных трубках. После застывания агара в глубине его вырастают изолированные колонии, которые извлекают путем распила трубки и пересевают на среду Китта-Тароцци (способ Вейнберга);
2) посев материала производят на чашки с питательной средой и инкубируют в анаэростате. Выросшие на чашке изолированные колонии пересевают на среду Китта-Тароцци.
21) Вирусы (история открытия, характеристика).
Первооткрывателем вирусов, основоположником вирусологии является русский ученый Дмитрий Иосифович Ивановский, открывший в 1892 году вирус табачной мозаики (ВТМ)
Вирусы настолько отличаются от микроорганизмов, что выделены в особое царство - царство Vira
Особенности вирусов, отличающие их от всех других живых существ:
1) наличие только одного типа нуклеиновой кислоты - ДНК или РНК, в то время как клетки всех остальных живых существ содержат ДНК и РНК, взаимодействие которых необходимо для биосинтеза белков,
2) отсутствие собственных белоксинтезирующих систем и клеточного строения;
3) внутриклеточный паразитизм на молекулярном (генетическом) уровне.
Внеклеточная форма вируса - вирион и вирус, находящийся внутри клетки хозяина - это две разные формы вируса.
Вирионы разных вирусов имеют размеры от 15 до 400 нанометров. Нанометр - это 10 -9 метра. Наиболее мелкие вирусы - вирусы полиомиелита - имеют вирион размером 17-25 им, средние - вирус гриппа - 80-120 нм, крупные - вирус оспы - 300-400 им.
В центре вириона располагается его геном. Это нуклеиновая кислота - ДНК или РНК (однонитевая или двунитевая). Плюс-однонитевая РНК несет две функции: наследственную и информационную, например у вируса полиомиелита. Минус-однонитевая РНК, как, например, у вируса гриппа, несет только наследственную функцию, и только в процессе репродукции вируса к ней достраивается плюс-нить иРНК.
Вокруг нуклеиновой кислоты симметрично располагаются белковые молекулы - капсомеры, составляющие капсид (лат. capsa - коробка). Различают спиральный тип симметрии, когда капсомеры уложены по всей длине молекулы нуклеиновой кислоты, и кубический, когда капсомеры располагаются в виде двадцатигранника (икосаэдра).
Вирионы, содержащие только нуклеиновую кислоту и белок, составляют нуклеокапсид. Это простые вирусы, например, ВТМ, вирус полиомиелита.
У вирионов сложноорга-низованных вирусов имеется еще поверхностная оболочка - суперкапсид, содержащий, кроме белков, также углеводы, липиды, компоненты клетки хозяина. Строение вириона лежит в основе классификации вирусов. По типу нуклеиновой кислоты их делят на: рибовирусы и дезоксири-бовирусы, далее по структуре вирионов, по месту размножения и по другим признакам проводится деление на семейства и роды.
Вследствие малых размеров вирусы не видны в световом микроскопе. Только наиболее крупный из них - вирус оспы - можно наблюдать в виде мелких точечных образований - элементарных телец Пашена.
Размножаясь в чувствительных клетках организма, вирусы оспы, бешенства, гриппа образуют в них внутриклеточные включения. Их можно обнаружить в световом или в люминесцентном микроскопе. Обнаружение внутриклеточных включений используется для диагностики. Например, включения Бабеша-Негри в нервных клетках обнаруживаются при бешенстве.
Морфологию вирионов изучают в электронном микроскопе. Вирусы имеют разные формы: сферическую, нитевидную, палочковидную.
Репродукция вирусов
Вирусы не способны размножаться на питательных средах - это строгие внутриклеточные паразиты. Более того, в отличие от риккетсий и хламидий, вирусы в клетке хозяина не растут и не размножаются путем деления. Составные части вируса - нуклеиновые кислоты и белковые молекулы синтезируются в клетке хозяина раздельно, в разных частях клетки - в ядре и в цитоплазме. При этом клеточные белоксинтезирующие системы подчиняются вирусному геному, его НК.
Репродукция вируса в клетке происходит в несколько фаз:
- Первая фаза - адсорбция вируса на поверхности клетки, чувствительной к данному вирусу.
- Вторая фаза - проникновение вируса в клетку хозяина путем виропексиса.
- Третья фаза - «раздевание» вирионов, освобождение нуклеиновой кислоты вируса от суперкапсида и капсида. У ряда вирусов проникновение нуклеиновой кислоты в клетку происходит путем слияния оболочки вириона и клетки-хозяина. В этом случае вторая и третья фазы объединяются в одну.
В зависимости от типа нуклеиновой кислоты этот процесс совершается следующим образом.
ДНК-содержащие (ДНК —> иРНК —>белок)
1. Репродукция происходит в ядрх: аденовирусы, герпес,папо-вавирусы. Используют ДНК-зависимую РНК - полимеразу клетки.
2. Репродукция происходит в цитоплазме: вирусы имеют свою ДНК-зависимую РНК полимеразу. РНК-содержащие.
1. Рибовирусы с позитивным геномом (плюс-нитиевые): пикорна-, тога-, коронавирусы. Транскрипции нет. РНК —>белок
2. Рибовирусы с негативным геномом (минус- нитиевые): грипп,корь, паротит, орто-, парамиксовирусы.
(-)РНК —> иРНК —> белок (иРНК комплементарная (-)РНК) Этот процесс идет при участии специального вирусного фермента - вирионная РНК-зависимая PHK-полимераза ( в клетке такого фермента быть не может).
(-)РНК -> ДНК —> иРНК —>белок (и РНК гомологична РНК) В этом случае процесс образования ДНК на базе (-)РНК возможен при участии фермента - РНК-зависимой ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы или ревертазы)
- Четвертая фаза - синтез компонентов вириона. Нуклеиновая кислота вируса образуется путем репликации. На рибосомы клетки транслируется информация вирусной иРНК, и в них синтезируется вирус-специфический белок.
- Пятая фаза - сборка вириона. Путем самосборки образуются нуклеокапсиды.
- Шестая фаза - выход вирионов из клетки. Простые вирусы, например, вирус полиомиелита, при выходе из клетки разрушают ее. Сложноорганизованные вирусы, например, вирус гриппа, выходят из клетки путем почкования. Внешняя оболочка вируса (суперкапсид) формируется в процессе выхода вируса из клетки. Клетка при таком процессе на какое-то время остается живой.
Описанные типы взаимодействия вируса с клеткой называются продуктивными, так как приводят к продукции зрелых вирионов.
Иной путь - интегративный - заключается в том, что после проникновения вируса в клетку и "раздевания" вирусная нуклеиновая кислота интегрирует в клеточный геном, то есть встраивается в определенном месте в хромосому клетки и затем в виде так называемого прови-руса реплицируется вместе с ней. Для ДНК- и РНК-содержащих вирусов этот процесс совершается по-разному. В первом случае вирусная ДНК интегрирует в клеточный геном. В случае РНК-содержащих вирусов вначале происходит обратная транскрипция: на матрице вирусной РНК при участии фермента "обратной транскриптазы" образуется ДНК, которая встраивается в клеточный геном. Провирус несет дополнительную генетическую информацию, поэтому клетка приобретает новые свойства. Вирусы, способные осуществить такой тип взаимодействия с клеткой, называются интегративными. К интегративным вирусам относятся некоторые онкогенные вирусы, вирус гепатита В, вирус герпеса, вирус иммунодефицита человека, умеренные бактериофаги.
Кроме обычных вирусов, существуют прионы - белковые инфекционные частицы, не содержащие нуклеиновую кислоту. Они имеют вид фибрилл, размером до 200 нм. Вызывают у человека и у животных медленные инфекции с поражением мозга: болезнь Крейтцфельда-Якоба, куру, скрепи и другие.
Последнее изменение этой страницы: 2016-08-10; Нарушение авторского права страницы
Читайте также: