Желточно солевой бульон

Естественные среды представляют собой природные субстраты (молоко, кровь, желчь, сыворотка, картофель). Искусственные содержат смесь природных органических веществ и продуктов их кислотного или ферментативного распада. Синтетические среды состоят из буферной солевой основы и растворов аминокислот, углеводов, пуринов, пиримидинов, нуклеотидов, нуклеозидов, жирных кислот, витаминов в точно установленных дозировках. В качестве источников азота в них используются аминокислоты. Достоинство этих сред в том, что они имеют постоянный состав, по ним можно определить потребности микробов в тех или иных питательных веществах.

Плотные питательные среды готовят из жидких с добавлением уплотнителя. В качестве уплотнителя обычно применяют агар-агар. Агар-агар – продукт, получаемый из морских водорослей, представляет собой желтоватый порошок или пластинки, содержит высокомолекулярные полисахариды, не расщепляется большинством микроорганизмов, не разрушается при автоклавировании, питательную ценность сред не изменяет, не подавляет рост микробов. Для иммунологических и бактериологических полей используется вымороженный, осветленный агар, который при кипячении или автоклавировании смеси порошка с водой расплавляется при температуре 85–100°С, а при охлаждении до 45–48°С образует гель.

Для приготовления, плотных питательных сред агар-агар добавляют в концентрации от 1,5 до 3%.

Простые среды.

Мясо-пептонный бульон (МПБ) является белковой основой всех сред.

Существует несколько способов приготовления МПБ:

а) на мясной воде с добавлением готового пептона – это так называемый мясо-пептонный бульон;

б) на переварах продуктов гидролиза исходного сырья при помощи ферментов (трипсина – бульон Хоттингера, пепсина – бульон Мартена).

Мясо-пептонный агар (МПА) – получают путей добавления к МПБ arap-arapa (1,5–3%). Если МПА распределен по диагонали пробирки или флакона – это скошенный агар. Для его получения пробирки для засты­вания среды оставляют в наклонном положении. Если среда распределе­на в пробирке вертикально высотой 5–7 см, это агар столбиком. МПА, застывший в чашках Петри в виде пластинки – пластинчатый агар. Если среда имеет вертикальный слой высотой 2–3 см, и диагональный слой такой же величины, это полускошенный агар.

Специальные питательные среды – среды, на которых создаются условия для выращивания тех бактерий, которые не растут на простых средах.

Кровяной агар или кровяной бульон – получают путем добавле­ния к питательной среде 5–10% подогретой стерильной дефибринированной крови барана, кролика лошади, человека. Среда используется для выделения стрептококков, пневмококков и других бактерий, а также для изучения гемолитической активности.

Сывороточный бульон или сывороточный агар получают путем добавления к простым средам 15–20% лошадиной или бычьей сыворотки. Среда применяется для выделения пневмококков, менингококков.

Желчный бульон или желчный агар получают путем добавления к питательной среде медицинской желчи без консерванта, или свежеполученной от крупного рогатого скота. Среда применяется для выделения брюшнотифозных, паратифозных и дизенте­рийных палочек.

Специальные среды для культивирования анаэробных бактерий: среда Китта-Тароцци состоит из питательного бульона, глю­козы и кусочков печени или мясного фарша для адсорбции кислорода.

Желатин – животный белок, продукт частичного гидролиза коллагена. Имеет вид бесцветных или светло-желтых пластинок без запаха и вкуса. В холодной воде набухает, сильно поглощая воду. При темпера­туре 30°С растворяется, при охлаждении до 20–22°С превращается в гель (студень). Используется в микробиологии для изучения протеолитических ферментов.

Дифференциально-диагностические среды позволяют различить один вид микроба от другого. Принцип построения дифференциально-диагностических сред основан на разной биохимической активности бактерий. В состав дифференциально-диагностических сред входит основная пи­тательная среда, обеспечивающая размножение бактерий, определенный химический субстрат, различное отношение к которому является диагнос­тическим признаком, индикатор, изменение цвета которого свидетельству­ет о разложении субстрата и образовании кислых продуктов.

Агар Эндо – плотная среда, применяется для выделения и первичной идентификации энтеробактерий. В состав ее входят, кроме питательной основы, лактоза и основной фуксин, обесцвеченный сульфитом и фосфатом натрия. Правильно приготовленная среда бесцветна или имеет слегка розовый оттенок. Колонии бактерий (кишечная палочка), ферментирующие лактозу, окрашиваются на ней в красный цвет; бактерии, не ферментирующие лактозу (сальмонеллы), остаются бесцветными.

Среда Левина (лактозоэозинметиленовый агар) – среда для выделения энтеробактерий. Колонии лактозоферментирующих бактерий окрашены в темно-синий или черный цвет, колонии лактозоотрицательных бактерий вырастают под цвет среды (светло-фиолетового цвета).

Среды Гисса – набор определенных углеводов для изучения ферментативной активности бактерий и их дифференциации по этим признакам.

Элективные питательные среды содержат дополнительные вещества, задерживающие рост грамположительных бактерий. Селективные питательные среды стимулируют рост одних микробов и угнетают рост других. Селективные условия получают путем добавления в сре­ду химических веществ. Так как в этих средах патогенные бактерии размножаются и накапливаются, их называют также средами обогащения.

Среда Плоскирева – плотная питательная среда, содержащая со­ли желчных кислот, бриллиантовый зеленый, лактозу и индикатор. Эта среда является не только селективной, так как подавляет рост многих микробов и способствует лучшему росту возбудителей брюшного тифа, паратифов, дизентерии, но и дифференциально-диагностической, так как лактозоотрицательные бактерии (шигеллы) образуют на ней бесцветные колонии, а лактозоположительные – кирпично-красные.

Селенитовая среда - является лучшей средой обогащения для сальмонелл и дизентерийных микробов Зонне. Селенит натрия, содержащийся в среде, стимулирует рост этих бактерий и подавляет рост сопутствующей флоры.

Среда Мюллера служит для накопления сальмонелл. К питатель­ной среде добавляют мел, раствор Люголя и гипосульфит натрия. При взаимодействии этих веществ образуется тетратионат натрия, который угнетает рост кишечных палочек, но создает благоприятные условия для размножения сальмонелл.

Висмут-сульфит агар (среда Вильсона-Блера) – содержит соли висмута, бриллиантовую зелень. Сальмонеллы растут на этой среде в виде колоний чернота цвета. Другие виды бактерий на этой среде роста не дают.

Желточно-солевой агар (ЖСА) – среда для выделе­ния стафилококков, содержит до 10% хлорида натрия, что подавляет большинство бактерий, содержащихся в материале. Кроме того, эта сре­да является и дифференциально-диагностической, так как присутствие яичного желтка позволяет выявить фермент лецитиназу (лецитовителлазу), который образуют патогенные стафилококки. Лецитиназа расщеп­ляет лецитин на фосфорхолины и нерастворимые в воде жирные кисло­ты, поэтому среда вокруг лецитиназоположительных колоний мутнеет и появляется опалесцирующая зона в виде «радужного венчика».

Теллуритовые среды (сывороточно-теллуритовый агар, кровяно-теллуритовый агар) – селективные среды для выделения дифтерийных бактерий, содержат теллурит калия. Бесцветная соль теллура, содержащаяся в питательной среде, восстанавливается дифтерийными бактерия­ми до металла, окрашивающего колонии в черный цвет.

Щелочной агар элективен для холерных вибрионов, щелочная реакция среды (рН 9,0) не препятствует росту холерных вибрионов, но тормозит рост других микроорганизмов.

Консервирующие среды – среды, содержат добавки, предупреждающие размножение и гибель микробов, что способствует сохранению их жизнеспособности. Консервирующие среды применяются, когда нет возможности быстрого посева на питательные среды.

Для бактерий наиболее употребительны консерванты:

а) глицериновая смесь, состоящая из 0,5 л химически чистого глицерина и 1,0 л физиологического раствора;

б) боратная смесь;

в) фосфатно-буферная смесь.

Для длительного сохранения свежевыделенных и производствен­ных культур применяют полужидкий голодный агар, в этой среде при пониженной жизнедеятельности микробов продукты обмена накапливаются незначительно, что способствует хорошему сохранению культур.

Специальные среды.

В бактериологии широко применяются сухие питательные среды промышленного производства, которые представляют собой гигроскопические порошки, содержащие все компоненты среды, кроме воды. Для их приготовления используются триптические перевары дешевых непищевых продуктов (рыбные отходы, мясокостная мука, технический казеин).

Они удобны при транспортировке, могут длительно храниться, избавляют лаборатории от громадного процесса приготовления сред, приближают к разрешению вопроса о стандартизации сред. Медицинская промышлен­ность производит сухие среды Эндо, Левина, Плоскирева, висмутсульфит агар, питательный агар, углеводы с индикатором ВР и другие.

Термостаты

Для культивирования микроорганизмов используют термостаты.

Термостат – это аппарат, в котором поддерживают постоянную температуру. Прибор состоит из нагревателя, камеры, двойных стенок, между которыми циркулирует воздух или вода. Температура регулируется тер­морегулятором. Оптимальная температура для размножения большинства микроорганизмов 37°С.

Методика приготовления пластинчатого агара

МПА расплавляют на водяной бане, затем остужают до 50-55°С. Горлышко флакона обжигают в пламени спиртовки, открывают чашки Петри так, чтобы вошло горлышко флаконы, не прикасаясь к краям чашки, выливают 10–15 мл МПА, закрыв крышку, покачивают чашку, чтобы среда равномерно распределилась, оставляют на горизонтальной поверхности до застывания. После подсушивания чашки с пластинчатым агаром хранят на холоде.

Посев петлей

Стерильной остуженной петлей берут каплю материала, левой рукой приоткрывают один край чашки, вносят петлю внутрь и у противоположного края делают петлей несколько штрихов на одном месте, затем петлю отрывают и засевают материал параллельными штрихами от одного края чашки к другому с интервалом 5–6 мм. В начале посева, когда микробов на петле будет много, они дадут сливной рост, но с каждым штрихом микробов на петле остается все меньше, и они будут оставаться одиночными и давать изолированные колонии.

Посев по методу Дригальского

Этот метод используется при посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой (гной, испражнения, мокрота). Для посева по методу Дригальского берут шпатель и несколько чашек (3–4). Шпатель – это инструмент, изготовленный из металлической проволоки или стеклянного дрота, загнутого в виде треугольника или Г-образно. Материал петлей или пипеткой вносят в первую чашку и равномерно распределяют шпателем по поверхности среды, этим же шпателем, не прожигая его, втирают материал в питательную среду во второй чашке, а затем – в третьей. При таком посеве в первой чашке будет сливной рост, а в последующих чашках вырастают изолированные колонии.

Выделение чистой культуры по Щукевичу

Для посева берут свежеприготовленную питательную среду с конденсатом. Исследуемый материал забирают петлей и вносят его осторожно, соблюдая правила асептики, не касаясь среды и стенок, в конденсационную воду. Бактерии с высокой подвижностью «выползают» на влажную поверхность скошенного агара.

В результате самостоятельной работы студент должен знать:

1. Классификацию, морфологию грибов, их методы изучения.

2. Классификацию и морфологию актиномицетов.

3. Правила противоэпидемических режимов и техники безопасности.

Уметь:

1. Дифференцировать микроорганизмы при микроскопии.

2. Микроскопировать окрашенные препараты.

3. Обеззараживать материал, обрабатывать руки дезинфирующими препаратами.

4. Приготавливать препараты из чистых культур.

Цена: 4 678.00 RUB

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: Биотехновация

Страна: Россия

Упаковка: 250г

Вид упаковки: полиэтиленовая банка

Среда элективная солевая, сухая, предназначенная для приготовления жидких питательных сред, используемых с целью выделения стафилококков при микробиологическом контроле

Функциональное назначение

Приготовление бульона для определения подвижности стафилококков при проведении микробиологических исследований. Рост идентифицируют по помутнению среды

Технические характеристики

Состав (в пересчете на 1 л готовой среды):
Пептон ферментативный, сухой - 5,0 г.
Гидролизат рыбный ферментативный - 8,0 г.
Экстракт автолизированных дрожжей осветленный - 1,4 г.
Натрий хлористый - 85,0 г.
Натрий углекислый - 0,3 г.
Натрий фосфорнокислый двузамещённый безводный - 0,3 г.
Представляет собой мелкодисперсный гомогенный, гигроскопичный, светочувствительный порошок желтого цвета. Готовая к употреблению среда светло-желтого цвета, прозрачная, пригодна в течение 10 суток при температуре хранения +2. 8°C в темном месте.
Условия хранения сухой среды: в упаковке предприятия-изготовителя в сухом защищенном от света месте, при температуре не выше +25°C, замораживание недопустимо.
Срок годности сухой среды – не менее 2 лет – до даты, указанной на упаковке, по истечении применению не подлежит.
Зарегистрировано в Росздравнадзор

Документация и инструкции

• 
  инструкция по применению (191.86 KB)

В случае отсутствия среды 6.10. используется для теста на индол.

Для приготовления бульона основной перевар Хоттингера разводят дистиллированной водой (или водопроводной) до содержания аминного азота 120 - 130 мг%, добавляют хлористый натрий в концентрации 0,5%, K2HPO4 - 0,1%. Устанавливают рН 7,4 - 7,6 и кипятят 15 - 20 мин. Приготовленный бульон фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки по 5 - 8 мл. Стерилизуют при 1 атм. 20 мин.

Индикаторная бумажка на индол

Спирт этиловый 96° - 50 мл

парадиметиламинобензальдегид - 2,5 - 3,0 г

фосфорная кислота (конц.) - 10 мл

Добавленные в спирт ингредиенты смешать до полного растворения. Полученной желтоватой жидкостью смочить край, приблизительной на 1/3, полоски фильтровальной бумаги. Цвет смоченного конца полоски бумаги должен быть желтым. При образовании индола изучаемой культурой цвет бумажки меняется от сиренево-розового до интенсивно-малинового.

Среда Кларка

дистиллированная вода - 1000 мл

Растворить ингредиенты, довести рН до 6,9 и профильтровать. Стерилизовать 20 мин при 115°С.

Раствор метилового красного для теста с метил-рот

Растворить 0,1 г метилового красного в 300 мл 90% этилового спирта. Развести до 500 мл стерильной водой, хранить при Т +4°С.

Реактивы для реакции Фогеса-Проскауэра

5% альфа-нафтол: растворить 5 г альфа-нафтола в 100 мл абсолютного этилового спирта. Хранить при Т +4°С.

40% КОН: растворить 40,0 г КОН (гранулы) приблизительно в 60 мл дистиллированной воды. Разбавить до 100 мл дистиллированной водой. Хранить при Т +4°С.

Цитратная среда Козера

Na(NH4)HPO4 - 1,5 г

натрия цитрат трехзамещенный - 3 г

дистиллированная вода - 1000 мл

Растворить ингредиенты в 950 мл дистиллированной воды, добавить 10 мл 0,5% спиртового раствора бромтимолового синего. Установить рН 6,8, проверяя значение рН на потенциометре. Довести объем дистиллированной водой до 1 л. Разлить в пробирки по 10 мл, стерилизовать в течение 15 мин при 121°С.

Среда Симмонса

Среда готовится аналогично среде Козера (6.15.), но после измерения рН в нее добавляют 20 г +- 0,1 г агар-агара на 1 л. Прогревают на водяной бане до растапливания агара, стерилизуют в течение 15 мин при 121°С. Разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

Среда Ресселя с мочевиной из сухих питательных сред

К 100 мл горячей стерильной дистиллированной воды добавляют 4 г сухого препарата с индикатором ВР и лактозой, 0,1 г глюкозы и 1 г мочевины. Полученную среду разливают в стерильные пробирки по 5 - 6 мл и стерилизуют при 0,5 атм 20 мин., или текучим паром 2 дня подряд по 15 - 20 мин.

Тресахарный агар с мочевиной по Олькеницкому

К 100 мл стерильного питательного агара добавляют 1 г лактозы, 0,02 г соли Мора, 0,3 г гипосульфита, 1 г сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины, 0,4% раствора фенолового красного 0,4 мл. Предварительно растворяют соль Мора с гипосульфитом в одной пробирке с небольшим количеством воды, а в другой - мочевину с углеводами. После растворения все смешивают с агаром и фильтруют через стерильную марлю. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 мин. Горячую среду скашивают в пробирках. Незасеянная среда имеет бледно-розовый цвет.

Солевой бульон

К 100 мл МПБ с рН 7,0 добавляют 6,5 г хлористого натрия. Разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 1 атм 20 мин.

Сахарный бульон

К 100 мл стерильного бульона Хоттингера с рН 7,2 - 7,4 и содержанием 130 - 150 мг% аминного азота, добавляют глюкозу в количестве 1,0 г. После растворения среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 мин.

Стерильное молоко

Стерильное молоко готовят из обезжиренного молока (кислотность 16 - 18°Т), которое разливают в пробирки по 10 мл. Стерилизуют при 0,75 атм 15 мин. Обезжиренное молоко получают путем центрифугирования или кипячения с последующим отстаиванием в цилиндре в холодильнике в течение 2-х дней.

Молочно-солевой агар

К 100 мл расплавленного и остуженного до 45°С 2% питательного агара с концентрацией 6,5% хлористого натрия добавляют в количестве 10 мл стерильное обезжиренное молоко. Среду тщательно перемешивают и разливают по чашкам.

Желточно-солевой агар

Желточно-солевой агар может быть приготовлен на основе сухого питательного агара, мясо-пептонного бульона или бульона Хоттингера.

При использовании МПБ к последнему добавляют 2% агар-агара и 6,5% хлористого натрия. При использовании бульона Хоттингера содержание аминного азота в нем должно составлять 150 мг%, для получения солевого агара добавляют 2% агар-агара и 6,5% хлористого натрия.

В случае использования сухого питательного агара к последнему добавляют 6,5% хлористого натрия.

Солевой агар разливают во флаконы по 200 мл и стерилизуют при 1 атм 30 мин.

Приготовление рабочего раствора желтка:

На дно стерильной чашки помещают яйцо, которое тщательно протирают ватой, смоченной спиртом. Пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца 2 отверстия. Через одно из этих отверстий из яйца полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную банку с 5 - 6 бусинами. К желтку постепенно добавляют частями по 20 - 30 мл 180 - 200 мл стерильного изотонического раствора NaCl. Затем содержимое тщательно встряхивают.

На 100 мл расплавленного и остуженного до 45°С солевого агара добавляют 20 мл рабочего раствора желтка. После полного размешивания агар в условиях бокса разливают в чашки по 15 - 17 мл. Чашки можно хранить в холодильнике до 1,5 - 2 недель.

Молочный агар

К 100 мл 2%-го расплавленного и остуженного до 45°С питательного агара добавляют 10 мл стерильного снятого молока. После тщательного перемешивания агар выливают в чашки по 12 - 15 мл.

Цитратная плазма кролика

Цитратная плазма кролика для реакции плазмокоагуляции выпускается в сухом виде. Готовят непосредственно перед употреблением согласно прописи, прилагаемой в наставлении.

Staphylococcus aureus

����������� ����� ��� ��������� S. aureus
- 110675 Giolitti-Cantoni broth - ������ ��������-�������
- 105406 Baird-Parker agar - ���� �����-�������
- 105404 Mannitol-salt phenol-red agar - ������-������� ���� � ��������� �������

Смотреть что такое "Желточно-солевой агар" в других словарях:

Стафилококковые инфекции — острые и хронические, локализованные и генерализованные инфекции, обусловленные стафилококками. Большинство случаев С.и. вызывается S. aureus, но их возбудителями могут быть также S. epidermidis, S. saprophiticus и др виды коагулазоотрицательных… … Словарь микробиологии

Посев (микробиология) — У этого термина существуют и другие значения, см. Посев. Культура микобактерий на яичной среде Левенштейна Йенсена … Википедия

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ — Аг антиген АЕ антитоксическая или антигенная единица антибактер. антибактериальный Ат антитело АТФ аденозинтрифосфорная кислота бактер. бактериальный бактериол бактериологический бактериоскоп. бактериоскопический БАС бактерицидная активность… … Словарь микробиологии

ЖСА — См. Желточно солевой агар (Источник: «Словарь терминов микробиологии») … Словарь микробиологии

мясо-пептонный агар 1 л

хлористый натрий 95 г

яично-желточная эмульсия 100 мл

1 л мясо-пептонного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95 г хлористого натрия, охлаждают до температуры 45±1 °С и добавляют 100 мл яично-желточной эмульсии. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Хранят при температуре +4…-10 °С не более 5 сут.

Эмульсия яично-желточная

куриное яйцо протирают ватой, смоченной этиловым спиртом, помещают в стерильную чашку Петри, стерильным инструментом пробивают с противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно отверстие полностью удаляют белок, затем, увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу с 50 мл физиологического раствора, содержимое встряхивают до однородной массы. Хранят при температуре +4…- 10 °С не более 72 ч.

Агар Байрд-Паркер

основы среды 90 мл

яично-желточная эмульсия 5 мл

раствор глицина (200 г/л) 6,3 мл

раствор пирувата натрия (200 г/л) 5мл

раствор теллурита калия (10 г/л) 1 мл

К 90 мл основы среды добавляют асептически 5 мл яично-желточной эмульсии (см. выше «желточно-солевой агар») и стерилизованные фильтрованием через мембранный фильтр растворы: 6,3 мл раствора глицина концентрации 200 г/л, 5 мл раствора пирувата натрия концентрации 200 г/л и 1 мл раствора теллурита калия концентрации 10 г/л. Хранят при температуре +4…-10 °С не более 48 ч.

Маннитно-солевой агар

вода дистиллированная 1000 г

хлористый натрий 75г

феноловый красный (1 %) 2,5 мл

В 1 л дистиллированной воды вносят 10 г пептона ферментативного сухого, 75 г натрия хлористого, 10 г маннита. Все ингредиенты растворяют в воде, затем вносят 2,5 мл 1%-го раствора фенолового красного, тщательно перемешивают, устанавливают рН 7,6±0,2, кипятят в течение 1 мин, прибавляют агар микробиологический, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при 121±1 °С в течение 15 мин. Хранят при температуре +4…-10 °С не более 14 сут.

Среда Гисса с маннитом и мальтозой

Готовят из сухого препарата промышленного производства в соответствии с указаниями на этикетке. Среды для обогащения бактерий вида Pseudomonas aeruginosa

Среда Хью-Лейфсона

Готовят из сухого препарата промышленного производства в соответствии с указаниями на этикетке.

Тиогликолевая среда

гидролизат казеина (в пересчете на сухой остаток 15 г

дрожжевой экстракт (10% в пересчете на сухой остаток) 5 г

натрий хлорид 2,5 г

тиогликолевая кислота 0,3 мл

раствор резазурина 1:1000 свежеприготовленный 1 мл

вода дистиллированная 1000 мл

рН среды после стерилизации 7,0-7,2

Смешивают все компоненты среды, кроме глюкозы и тиогликолевой кислоты.

Цистин предварительно растворяют в небольшом количестве ди-стиллированной воды при постепенном добавлении 10-20% раствора NaOH до его полного растворения. Смесь подщелачивают 10% раствором NaOH до рН 8,0-8,2, кипятят, постоянно помешивая до расплавления агара (5-10 минут). Можно автоклавировать 20 минут при 1000С, затем прибав-ляют горячую воду до первоначального объема, прибавляют глюкозу и тиогликолевую кислоту, фильтруют, устанавливают рН 7,2-7,3. Добавляют раствор резазурина, смешивают и разливают в стерильные пробирки по 20 мл. Стерилизуют 20 минут при 1200С.

Допускается приготовление среды без раствора резазурина натрия.

Допускается применение других сортов агара, но с заранее вытитро-ванным количеством.

Тиогликолевую среду хранят до посева, предохраняя ее от света, при комнатной температуре не более 7 суток со дня приготовления.

Среда Сабуро

сухой пептон ферментативный 10 г

глюкоза или мальтоза 100 г

вода дистиллированная 1000 г

рН среды после стерилизации 5,5-5,8

В воду добавляют пептон, кипятят 10 минут и фильтруют. К полученному объему после фильтрации добавляют глюкозу или мальтозу. Если рН выше, чем 5,7, нужно подкислить 5% раствором HCl до рН 5,7.

Разливают в стерильные пробирки по 10 мл.

Стерилизуют при 1100С (0,5 кгс/кв. см - 30 минут).

Изотонический (0,85% -ный водный раствор хлорида натрия).

0,85г хлористого натрия растворяют в 100см3 дистиллированной воды и стерилизуют при температуре 121 + 10С. Хранят при комнатной температуре не более 14 суток.

Бульон Хоттингера с 0,5% (1,0%) глюкозы

мясной перевар по Хоттингеру до разведения аминного азота на 140-160 мг%

натрий хлористый 0,5%

вода дистиллированная 7,2-7,4

Смешивают мясной перевар по Хоттингеру с водой в таком соотношении, чтобы в среде содержалось 140-160 мг% аминного азота, добавляют хлористый натрий. Смесь подщелачивают 10% NaOH до рН 8,0-8,2, кипятят на открытом огне 10 минут или автоклавируют при 1000С 10 ми-нут. Если есть выкипание, доводят объем до первоначального кипяченой или дистиллированной водой. Фильтруют через ватный тампон, прибав-ляют 0,5% (1,0%) глюкозы, устанавливают рН 7,3-7,5 добавлением 5% HCl. Фильтруют и разливают в стерильную посуду.

Стерилизуют при 1100С в течение 30 минут.

Приготовление растворов и реактивов

Изотонический 0,85% раствор хлористого натрия (физиологический раствор). 0,85 г хлористого натрия: растворяют в 100 мл дистиллированной воды и стерилизуют при 121±1 °С в течение 15 мин. Хранят при комнатной температуре не более 14 сут.

Раствор фенолового красного вмассовой концентрации 1%: 0,1 г фенолового красного растирают, добавляя небольшими порциями 2,82 мл 0,1 М раствора натрия гидроокиси и 20 мл 96% спирта. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят водой до метки. Хранят во флаконе из темного стекла в холодильнике при температуре +4…-10 °С в течение 7 сут.

Реактивы для проведения оксидазного теста:

Вариант 1: 1%-й водный раствор тетраметил-n-фенилендиамина гидрохлорида. Готовят перед употреблением.

Вариант 2. Реактив № 1: 1%-й спиртовой раствор б-нафтола; реактив № 2: 1%-й водный раствор фенилендиаминового соединения. Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками: первый -- до 1 мес., второй -- до 1 недели. Перед употреблением к 3 частям первого раствора добавляют 7 частей второго раствора. Могут быть использованы коммерческие тест-системы для постановки оксидазного теста (СИБ-оксидаза или аналоги).

(Номенклатурный номер: 01120501) Жидкая элективная среда предназначена для накопления солеустойчивых микроорганизмов при наличии их в испытуемых образцах продукции. Питательная основа - гидролизат белков молока. Содержание соли не менее 7,5 %

Солевой бульон

по ГОСТ 30347-2016

Номенклатурный номер: 01120501

(производство ВНИИМС – филиал ФГБНУ «ФНЦ пищевых систем им. В.М. Горбатова» РАН)

ИНСТРУКЦИЯ по приготовлению солевого бульона

по ГОСТ 30347-2016

Приготовление: 100 г сухой среды растворяют в (1±0,01) дм 3 воды. Смесь тщательно перемешивают, доводят до кипения и разливают по колбам или пробиркам. Затем стерилизуют при температуре (121±2) ºС в течение (15±1) мин.

Staphylococcus aureus

����������� ����� ��� ��������� S. aureus
- 110675 Giolitti-Cantoni broth - ������ ��������-�������
- 105406 Baird-Parker agar - ���� �����-�������
- 105404 Mannitol-salt phenol-red agar - ������-������� ���� � ��������� �������

Для выделения культур стафилококков обычно используют 5%-ный кровяной агар (кровь овцы, кролика, крупного рогатого скота). При исследовании образцов, содержащих постороннюю микрофлору, целесообразно использовать селективные среды.

Таблица 9. Дифференциальные признаки стафилококков, имеющих основное медицинское значение

С целью дифференциации патогенных стафилококков от сапрофитных, а также от микрококков, используют среды, позволяющие одновременно определить один из признаков, характеризующих патоген­ные стафилококки. Приводим рецепты некоторых питательных сред.

Молочно-солевой агар

В 100 мл МПБ растворяют 6,5 г хлорида натрия, 20 г агар-агара. Устанавливают рН 7,4, стерилизуют при 121°С 20 минут. Перед использованием агар расплавляют, охлаждают до 45°С, добавляют 10% стерильного обезжиренного молока и разливают по чашкам Петри. На этой среде определяют пигментообразование и способность к росту при наличии 6,5% хлорида натрия.

Лактозо-солевой бульон с фенолротом

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г триптона, 5 г мясного экстракта, 1 г дрожжевого экстракта, 5 г хлористого лития, 20 г агара. Устанавливают рН 6,8, разливают по пробиркам и стерилизуют при 121°С 15 минут. При росте коагулазоположигельных стафилококков среда желтеет (тест на коагулазу положительный).

Теллурит-полимиксин-желточный агар Крисли

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г триптона, 5 г дрожжевого экстракта, 5 г маннита, 20 г хлорида натрия, 2 г хлористого лития, 18 г агара. Устанавливают рН 7,3, стерилизуют 15 минут при 121°С. Перед использова­нием в среду добавляют 100 мл 30%-ной желточной эмульсии (на фи­зиологическом растворе), 0,4 мл стерилизованного фильтрацией 1%-ного водного раствора полимиксина М, 10 мл стерилизованного автоклавированием (121°С 15 мин) 1%-ного водного раствора теллурита натрия.

Среда Джиолиотта и Кантони

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г триптона, 5 г мясного экстракта, 5 г дрожжевого экст­ракта, 5 г хлористого лития, 20 г маннита, 5 г хлористого натрия, 1,2 г глицина, 3 г пирувата натрия. Устанавливают рН 6,9, стерилизуют при 115°С 20 мин. Перед употреблением к среде добавляют 0,1 мл 1%-ного водного раствора теллурита натрия, стерилизованного фильтра­цией, При росте коагулазоположительных стафилококков наблюдается почернение среды или черный осадок.

Среда Бэрда-Паркера

К 90 мл основной среды с температурой 45°С добавляют 6,3 мл глицинового раствора, 1 мл раствора теллурита натрия, 5 мл эмульсии желтка, перемешивают и разливают в чашки Петри. Среда пригодна к использованию в течение 28 дней (хранение при 4°С). Перед посевом на поверхность среды наносят 0,5 мл 20%-ного водного раствора пирувата натрия, стерилизованного фильтра­цией; распределяют по поверхности, подсушивают. Колонии коагула­зоположительных стафилококков черные, блестящие, с узкой серо-белой полосой и окружены прозрачной зоной.

Желточная эмульсия. Свежее куриное яйцо выдерживают в 0,001%-ном растворе HgCl₂. Соблюдая требования асептики, отделяют желток и эмульгируют его в 200 мл физиологического раствора.

Глициновый раствор. Глицин — 20 г, дистиллированная вода — 100 мл. Стерилизуют при 120°С 15 минут.

Раствор теллурита натрия. Теллурит натрия — 1 г, дистиллированная вода — 100 мл. Стерилизуют фильтрацией.

Желточно-солевой агар Чистовича

В расплавленный МПА с 10% хлорида натрия (рН 7,2), охлажденный до температуры 60°С, добавляют желточную эмульсию. После тщательного перемешивания питательную среду разливают в чашки Петри.

Среда Чаплина-Бернса

К 100 мл МПА добавляют 3,3 мл 0,1%-ного водного раствора кристаллического фиолетового и 5 г лактозы. Устанавливают рН 6,8. Стерилизуют автоклавированием (110°С 30 минут). Колонии патогенных стафилококков растут быстрее, чем непатогенных, и приобретают фиолетовый или оранжевый цвет.

Среда Чемпена (для выделения патогенных стафилококков)